Design of heparanase inhibitors focusing on molecular bending and competitive interaction: aiming to suppress skin inflammatory diseases

专注于分子弯曲和竞争性相互作用的乙酰肝素酶抑制剂的设计：旨在抑制皮肤炎症性疾病

基本信息

批准号：
22K06587
负责人：
東伸昭
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Hoshi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究課題では、論文で報告したヘパラナーゼ酵素活性を抑制する糖鎖の情報をもとに、[1]特異性と高親和性の二要素を分子内に最適化した糖鎖由来阻害分子を創出する、[2]ヘパラナーゼの競合分子であるヘパラナーゼ2の発現や阻害効果を増強する方法を見出す、さらに[3]ではヘパラナーゼの機能抑制によって基底膜と表皮構造の正常化、皮膚炎の抑制が可能であるか見出す、の３点を目的としており、これらの成果を統合することで、ヘパラナーゼを標的とする創薬に取り組む。課題1では、阻害分子に細胞特異性を付与する一つの方法として細胞特異的な抗体の機能に着目する。すなわち、ヘパラナーゼ阻害効果を有する硫酸化糖鎖を抗体に結合させた分子の創生を試みた。抗体を蛍光タンパク質で標識する方法を応用し、異なる官能基を有する２価性の介在分子を介する結合によって、ヘパラナーゼ抑制性糖鎖とがん特異的抗体の結合が示唆される実験結果を得た。一方で、両者の結合効率の決定には至らず、また未反応物質を取り除く方法についても今後の検討課題として残された。課題2ではヘパラナーゼ2の遺伝子クローニングならびにそのFc融合タンパク質としての発現を行った。産生量が高くないものの、1 microg/ml程度の濃度で、精製されたヘパラナーゼ2融合タンパク質を調製することが可能となった。課題3では、阻害物質の評価に用いることの可能なアトピー性皮膚炎動物モデルの作出に取り組んだ。低分子ハプテンとして知られるDNFBで経皮的に処置することにより、表皮の肥厚、真皮マスト細胞の増加、発赤を特徴とする皮膚炎症を確認することができた。

在本研究项目中，根据论文中报道的抑制乙酰肝素酶活性的糖链信息，[1]我们将创建一种糖链衍生的抑制分子，该分子在分子内优化了特异性和高亲和力两个要素。 2]乙酰肝素酶竞争分子乙酰肝素酶2的表达和抑制作用此外，[3]旨在找出是否可以通过抑制乙酰肝素酶的功能来使基底膜和表皮结构正常化并抑制皮炎，并通过这样做来整合这些结果，我们将致力于靶向药物的发现。乙酰肝素酶。在任务 1 中，我们将重点关注细胞特异性抗体的功能，将其作为赋予抑制分子细胞特异性的一种方式。具体来说，我们试图创造一种分子，其中具有乙酰肝素酶抑制作用的硫酸化糖链与抗体结合。通过应用荧光蛋白标记抗体的方法，我们获得的实验结果表明乙酰肝素酶抑制糖链和癌症特异性抗体通过具有不同官能团的二价介入分子结合。另一方面，两者之间的结合效率尚未确定，去除未反应物质的方法仍然是未来研究的一个问题。在受试者2中，我们克隆了乙酰肝素酶2的基因并将其表达为Fc融合蛋白。尽管产量不高，但已经可以制备浓度约为1μg/ml的纯化乙酰肝素酶2融合蛋白。在主题 3 中，我们致力于创建可用于评估抑制剂的特应性皮炎动物模型。通过使用 DNFB（一种低分子量半抗原）进行透皮治疗，我们能够确认以表皮增厚、真皮肥大细胞增加和发红为特征的皮肤炎症。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

p57Kip2 is an essential regulator of vitamin D receptor-dependent mechanisms.

p57Kip2 是维生素 D 受体依赖性机制的重要调节因子。

DOI：
10.1371/journal.pone.0276838
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
3.7
作者：
Takahashi K; Amano H; Urano T; Li M; Oki M; Aoki K; Amizuka N; Nakayama KI; Nakayama K; Udagawa N; Higashi N.
通讯作者：
Higashi N.

アトピー性皮膚炎皮疹部におけるヘパラナーゼの発現

特应性皮炎皮疹区乙酰肝素酶的表达