Studies on the biological function of the ovarian peptide CiDR1

卵巢肽CiDR1的生物学功能研究

• 批准号: 22K06307
• 负责人: 松原 伸
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Suntory Foundation for Life Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06307/
• 关键词: カタユウレイボヤ; 卵巣ペプチド; 卵巣; 卵胞成長; ペプチドホルモン; 受容体

本研究では、カタユウレイボヤの卵巣から新規に同定したペプチドホルモンCiDR1について、受容体遺伝子を同定し、卵胞成長における機能を明らかにする事を目的としている。2022年度は研究計画に従い、機械学習による受容体予測によって得られた15の受容体候補遺伝子について、細胞内Ca2+放出を促すG16alphaとの融合タンパクとしてSf9細胞に発現させ、ペプチドとの反応性を細胞内Ca2+放出として検証した。多検体自動蛍光測定装置FlexStationや、かん流装置と共焦点レーザー顕微鏡を用いてリガンド処理による細胞内カルシウムイオンの放出をタイムラプスで観察したが、CiDR1との有意な相互作用を検出することはできなかった。一方で、CiDR1の機能解析については、計画に先行してin situ hybridizationによる卵巣内局在解析を行い、Stage II卵胞のテスト細胞特異的に発現していることを明らかにした。また、in vivoの機能解析についてはCiDR1に特異的なCRISPR RNAを設計し、ゲノム編集体の作製に着手した。

本研究的目的是鉴定从玻璃海鞘卵巢中新发现的肽激素CiDR1的受体基因，并阐明其在卵泡生长中的功能。根据研究计划，2022财年，通过机器学习的受体预测获得的15个受体候选基因在Sf9细胞中表达为与促进细胞内Ca2+释放的G16α的融合蛋白，并在细胞中研究了与肽的反应性。经验证为内部 Ca2+ 释放。我们使用 FlexStation、多分析物自动荧光测量装置、灌注装置和共焦激光显微镜观察到配体处理导致细胞内钙离子的延时释放，但未检测到与 CiDR1 的显着相互作用。另一方面，关于CiDR1的功能分析，我们在计划前使用原位杂交进行了卵巢内定位分析，结果发现它在II期卵泡的测试细胞中特异性表达。此外，为了进行体内功能分析，我们设计了针对 CiDR1 的 CRISPR RNA，并开始创建基因组编辑的生物体。

项目成果

マイクロCTによるホヤ卵巣内部構造の解析

海鞘卵巢内部结构的显微CT分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 松原 伸;白石 慧;大杉 知裕;川田 剛士;佐竹 炎
• 通讯作者: 佐竹 炎

Comparative analysis of transcriptomic profiles among ascidians, zebrafish, and mice: insights from tissue-specific gene expression

海鞘、斑马鱼和小鼠转录组谱的比较分析：组织特异性基因表达的见解

• 发表时间: 2023
• 作者: 松原 伸

卵胞成長期のテスト細胞に存在する分泌顆粒と新規卵巣ペプチドホルモンの解析

卵泡生长过程中测试细胞中存在的分泌颗粒和新型卵巢肽激素的分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 松原 伸