ヒトヘルペスウイルス6感染に必須なウイルスリガンドの立体構造決定と機能解析

人类疱疹病毒6感染必需的病毒配体的三维结构测定和功能分析

• 批准号: 22K06113
• 负责人: 西村 光広
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06113/
• 关键词: ヒトヘルペスウイルス6; ウイルスリガンド; 中和抗体; X線結晶構造解析; 構造生物学

本研究ではヒトヘルペスウイルス6B(HHV-6B)の感染に必須なウイルスタンパク質複合体gH/gL/gQ1/gQ2の原子レベルの高分解能での立体構造解析を行う。HHV-6BのgH/gL/gQ1/gQ2複合体を構成するgH/gLは単純ヘルペスウイルスやエプスタインバーウイルス、ヒトサイトメガロウイルスなどの他のヘルペスウイルスに広く共通する因子であるが、一方でgQ1/gQ2はHHV-6Bと類縁のHHV-6Aにしか見られない独自の因子であり、HHV-6BとHHV-6Aの間でのgQ1およびgQ2の違いがHHV-6BとHHV-6Aのウイルスとしての違いにおいて重要である。これまでの研究ですでにHHV-6B gH/gL/gQ1/gQ2複合体の結晶化およびX線結晶回折測定を行うことで、最大分解能3.8Åの回折データが得られており、HHV-6B gH/gL/gQ1/gQ2複合体の立体構造が明らかとなりつつある。gH/gLに相当する部分と結晶化に用いた抗体Fabについては構造解析が可能である一方、gQ1/gQ2部分についてはタンパク質の二次構造が確認できているものの、構造の決定にはより高分解能のデータを利用した構造解析が必要である。当該年度においては、不凍液混在下で結晶化させた50個以上の結晶を用いた回折データの統合による高分解能データの取得を試みた結果、最大分解能5Åの回折データを得た。用いた結晶のサイズを考慮すると本方法で高分解能データの取得が可能であることが示唆された。また継続して結晶化実験およびX線回折測定を実施するために、HHV-6B gH/gL/gQ1/gQ2複合体タンパク質の発現方法について再検討を行った結果、高密度で哺乳動物細胞を振盪培養する方法により、より効率的な試料の調製が可能となった。

在本研究中，我们将以高原子分辨率分析病毒蛋白复合物 gH/gL/gQ1/gQ2 的三维结构，该复合物对于人类疱疹病毒 6B (HHV-6B) 感染至关重要。 gH/gL构成HHV-6B的gH/gL/gQ1/gQ2复合体，是其他疱疹病毒（例如单纯疱疹病毒、Epstein-Barr病毒和人巨细胞病毒）广泛共有的因子； 1/gQ2是仅在HHV-6A中发现的独特因子，其与HHV-6B相关，并且HHV-6B和HHV-6A之间的gQ1和gQ2的差异对于差异而言是重要的。前期研究已经对HHV-6B gH/gL/gQ1/gQ2配合物进行了结晶和X射线晶体衍射测量，并获得了最大分辨率为3.8 Å的衍射数据/gL/的三维结构。 gQ1/gQ2 复合体变得越来越清晰。虽然可以分析与gH/gL对应的部分和用于结晶的抗体Fab的结构，但gQ1/gQ2部分的蛋白质二级结构已得到确认，但结构难以确定。需要使用分辨率数据进行分析。本财年，我们尝试通过使用在防冻剂存在下结晶的 50 多个晶体的衍射数据进行整合来获得高分辨率数据，结果获得了最大分辨率为 5 Å 的衍射数据。考虑到所用晶体的尺寸，建议使用这种方法可以获得高分辨率数据。此外，为了继续进行结晶实验和X射线衍射测量，我们重新审视了HHV-6B gH/gL/gQ1/gQ2复合蛋白的表达方法，发现高密度振荡哺乳动物细胞培养方法能够更高效地表达样品制备。

项目成果

ヒトヘルペスウイルス6B gH/gL/gQ1/gQ2複合体のX線結晶構造解析

人疱疹病毒6B gH/gL/gQ1/gQ2复合物的X射线晶体结构分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 西村 光広;竹下 浩平;有井 潤;森 康子
• 通讯作者: 森 康子