新規アッセイ系を用いた卵子のトランスクリプトーム解析

使用新的检测系统进行卵母细胞转录组分析

基本信息

批准号：
22K06056
负责人：
加藤容子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kindai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

研究代表者者らは、ブタ卵を保存する新たな手法として「低温感作に関わらない培養温度域で保存する」という手法を開発した。ブタ卵は低温に対する感受性が高く、他の動物種で実施されている低温保存法があまり適切でないためである。既に生物学的な検討として、保存後、核のある状態の卵を用いた単為発生と卵の核を除去して体細胞核を導入して作出した（保存卵は細胞質のみ）核移植を実施し、それぞれの体外発生能を支持できる保存時間が異なることを明らかにしてきた。本課題では、この保存系をツールとして使用して、体外培養時に生じる卵細胞質の老化を阻止する因子や体細胞核を初期化する因子を大規模トランスクリプトームにより明らかにすることができるのではないかと考えた。R４年度は、保存卵におけるROS、GSH、ミトコンドリア膜電位などといったいくつかの生化学的特性を検討し生物学的検討の結果と照合した。その結果、２４時間保存までは、対照区と比較してそれらの数値が大きくは変化しないことがわかった。また、保存培地に抗酸化物質を添加したり、保存前に卵をシクロスポリン（Cs）A で前処置することによって、若干、生化学的特性評価に用いた指標の値を改善する働きのあることもわかった。また保存２７時間を超えると徐々に変化が起き始めることもわかった。この結果は生物学的検討の結果と同じ傾向であることがわかった。このような結果から、遺伝子発現の差異を比較検討するのに適切と考えられる時間帯域を決定できた。そして、現在はそれらの時間帯の卵を回収し始めている。

主要研究人员开发了一种保存猪蛋的新方法，该方法涉及将它们保存在与低温致敏无关的培养温度范围内。这是因为猪蛋对低温高度敏感，使得用于其他动物物种的低温保存方法不太适用。生物学研究已经进行，包括利用储存后带有细胞核的卵子进行孤雌生殖，以及通过去除卵子的细胞核并引入体细胞核而产生的核移植（保存的卵子只有细胞质）。已澄清，可以支持每种类型的体外发育能力的存储时间是不同的。在这个项目中，我们将能够利用这个保守的系统作为工具，通过大规模转录组分析来阐明防止体外培养过程中发生的卵细胞质老化的因素以及重新编程体细胞核的因素。我就是这么想的。在R4年，对皮蛋中ROS、GSH、线粒体膜电位等多项生化特性进行了研究，并与生物学研究结果进行了比较。结果发现，直到储存24小时，这些值与对照组相比都没有显着变化。此外，我还了解到，在储存介质中添加抗氧化剂或在储存前用环孢素（Cs）A对鸡蛋进行预处理可以稍微提高用于生化表征的指标值。还发现储存27小时后开始逐渐发生变化。发现该结果与生物学检查的结果具有相同的趋势。根据这些结果，我们能够确定一个被认为适合比较检查基因表达差异的时间范围。我们现在开始在那个时期收集鸡蛋。