Analysis of mammalian survival mechanism under stressed temperature using novel mutant-HSF1 knock-in mice

利用新型突变体HSF1基因敲入小鼠分析应激温度下哺乳动物的生存机制

基本信息

批准号：
22K06044
负责人：
林田直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、本研究課題の中心となる、新規の変異型熱ショック転写因子1（HSF1）のノックインマウスの作製に1年間を費やした。具体的に作製を開始したのは、熱耐性が強くなることが予想される活性型 HSF1 ノックインマウス (caHSF1-KI) と、熱耐性が弱くなると考えられる DNA 結合能欠損 HSF1 ノックインマウス (R71G-KI) の2種類である。いずれも、ゲノム編集の手法を用いて行った。caHSF1-KI については、活性型にするために除去しようとした配列が若干異なってしまったものの、1匹変異を有するマウスを得ることが出来た。除去を狙った配列はΔ221-315であったが、この1匹は5アミノ酸が残ってしまうΔ226-315の変異を有するマウスであったものの、この5アミノ酸が残っていても活性型になると予想し、このマウスの系統化を目指して交配を行ったところ、この変異を受け継ぐ次世代のマウスを得ることに成功した。この変異マウスが多数得られたため、全臓器の採取を数匹から行い、これからタンパク質およびRNAを回収して、HSF1の主なターゲット分子であるHSP70や同じHSFであるHSF2の発現の解析を行うと共に、目的である caHSF1-KI を得るため、得られたマウスを用いて、L395E変異を入れるゲノム編集を行っている。R71G-KI についても、ゲノム編集を行った産仔が得られており、現在、正しい変異が入っているかを確認中である。決して早くマウス作製が進んでいるとは言えないが、着実に進んでいるのは間違いなく、想定の範囲内で順調な結果が得られたと考えている。

2022年，我们花了一年的时间创造了一种新型突变型热休克转录因子1（HSF1）敲入小鼠，这是该研究项目的核心。具体来说，我们开始创建一种活跃的 HSF1 敲入小鼠（caHSF1-KI），预计其具有更强的耐热性，以及一种 DNA 结合缺陷的 HSF1 敲入小鼠（R71G-KI，预计其耐热性较弱）。耐热性））有两种类型。所有这一切都是使用基因组编辑技术完成的。关于caHSF1-KI，尽管我们试图删除以使其活跃的序列略有不同，但我们还是获得了一只具有突变的小鼠。我们想要去除的序列是Δ221-315，虽然这只小鼠有Δ226-315突变，留下了5个氨基酸，但预计即使这5个氨基酸保留，小鼠也会变得活跃，但是，当它们杂交时。他们的目的是培育出这些小鼠的品系，并成功地培育出继承了这种突变的下一代小鼠。由于我们获得了大量这些突变小鼠，我们从几只小鼠身上收集了整个器官，回收了蛋白质和RNA，并分析了HSF1的主要靶分子HSP70和类似HSF2的表达，以便获得HSF。为了获得所需的 caHSF1-KI，我们使用所得小鼠进行基因组编辑以引入 L395E 突变。关于R71G-KI，也获得了基因组编辑的后代，目前我们正在确认它们是否含有正确的突变。虽然我们不能说鼠标生产进展很快，但毫无疑问它正在稳步进展，我们相信结果完全在我们的预期之内。