新規PIK3CD遺伝子変異によるSLE発症機構を解明する

阐明新型 PIK3CD 基因突变引起的 SLE 发病机制

基本信息

批准号：
21K07850
负责人：
清田今日子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Oita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07850/
关键词：
PIK3CD SLE 機能獲得型変異細胞内代謝

项目摘要

新規PIK3CD遺伝子変異を導入した細胞株を用いて、シグナル経路の探索と機能解析を行なった。PIK3CD遺伝子の機能獲得型変異では、mTOR経路の活性化亢進の報告があり、自身のこれまでの研究でもAKTのリン酸化の亢進を確認している。また、PIK3CD遺伝子の機能獲得型変異では、免疫老化のために免疫不全となることが報告されており、免疫老化の場合は、細胞内代謝で解糖系が亢進することが知られている。そのため、PI3K/AKT/mTOR経路以外の経路の探索の前に、新規遺伝子変異を導入した細胞株を用いて、グルコースの取り込みについて解析を行った。その結果、解糖系の亢進が生じており、Glut1の発現も亢進していた。解糖系の亢進に関して、酸素消費速度についても検討を行ったが、それについては、一貫したデータが取れなかった。測定の時間や刺激についての条件検討が必要と考えている。In vivoモデルとして、ゼブラフィッシュを用いた実験も行ったが、ヒトPIK3CD遺伝子を全身に発現させるとWTに対しても毒性があり、腫瘤形成をしたために十分な機能解析ができなかった。そのため、リンパ球に特異的に発現させるモデルフィッシュを作製したが、発現が一定せず、十分な解析ができていない。

使用具有新型 PIK3CD 基因突变的细胞系，我们探索了信号通路并分析了其功能。据报道，PIK3CD 基因的功能获得性突变会导致 mTOR 通路的激活增加，他自己的研究也证实了 AKT 磷酸化的增加。此外，据报道，PIK3CD基因的功能获得性突变会因免疫衰老而导致免疫缺陷，并且已知在免疫衰老的情况下，细胞内代谢中的糖酵解增加。因此，在寻找 PI3K/AKT/mTOR 途径以外的途径之前，我们使用引入了新基因突变的细胞系分析了葡萄糖摄取。结果，糖酵解增强，Glut1 表达也增强。关于糖酵解的增强，我们还研究了耗氧率，但我们无法获得这方面的一致数据。我们认为有必要考虑有关测量时间和刺激的条件。还使用斑马鱼作为体内模型进行了实验，但人PIK3CD基因的全身表达即使对于WT动物也是有毒的，并且会发生肿瘤形成，因此无法进行充分的功能分析。因此，创建了一种模型鱼，其中该蛋白质在淋巴细胞中特异性表达，但表达不一致并且无法进行充分的分析。