Analysis of evolution and host specificity of Flaviviridae viruses

黄病毒科病毒的进化和宿主特异性分析

基本信息

批准号：
16J02628
负责人：
田村友和
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

フラビウイルス科ウイルスの進化と宿主特異性を明らかにするために、以下の研究を前年度に引き続き実施した。1. フラビウイルス科ウイルスの粒子産生における膜結合性タンパク質NS1の役割の解析細胞外に分泌されるフラビウイルスのNS1タンパク質がウイルスの粒子産生に関与するかを解析した。まず、NS1の六量体形成に関与するアミノ酸部位をバイオインフォマティクスの手法にて予測した。次に、昨年度作製したレポーターウイルスを基に、ウイルスのNS1遺伝子にレポーター遺伝子を挿入して、自立複製および増殖能を欠いたウイルスを作出した。予測部位のアミノ酸を異なる種類のアミノ酸に置換した103種類のNS1タンパク質を強制発現する培養細胞を作製し、自立増殖能のないウイルスを用いて、複製と粒子産生能を免疫染色法とレポーター活性にて評価した。その結果、273番目のアミノ酸を置換したNS1を発現させた細胞では、ウイルスゲノムは複製したが、ウイルス粒子は産生されなかった。さらに、この変異NS1タンパク質は培養上清中に分泌されなかった。また、この部位の1アミノ酸を置換したウイルスを作出し、C型肝炎ウイルスとペスチウイルスがそれぞれ粒子産生に利用する宿主のアポリポタンパク質とウイルスタンパク質Ernsにてフラビウイルスの粒子産生を代償できることを明らかにした。以上の成績からフラビウイルス科に属するウイルスの間で、分泌する糖タンパク質が粒子産生において必須であり、それらは共通する機能を持つことが実証された。2. 新規レポーター遺伝子を搭載したフラビウイルス科ウイルスの評価タンパク質の構造とその特性を利用し、外来遺伝子の適した挿入部位を選抜する方法を確立した。さらに、この方法で作出したレポーターウイルスは生体で親株と同等の病原性を示し、ルシフェラーゼ活性値にてウイルスの増殖性を評価することが出来ることがわかった。

为了阐明黄病毒科病毒的进化和宿主特异性，作为前一年的延续，进行了以下研究。 1.膜结合蛋白NS1在黄病毒科病毒颗粒产生中的作用分析我们分析了胞外分泌的黄病毒NS1蛋白是否参与了病毒颗粒的产生。首先，我们使用生物信息学来预测参与 NS1 六聚体形成的氨基酸位点。接下来，在去年制造的报告病毒的基础上，在病毒的NS1基因中插入报告基因，制造出缺乏自主复制和增殖能力的病毒。我们创建了强制表达103种NS1蛋白的培养细胞，其中预测位点的氨基酸被不同类型的氨基酸取代，并使用不具有自主繁殖能力的病毒，我们研究了复制和颗粒生产使用免疫染色和报告活性来评估其能力。结果，在表达第273个氨基酸被取代的NS1的细胞中，病毒基因组复制，但没有产生病毒颗粒。此外，这种突变的 NS1 蛋白不分泌到培养物上清液中。此外，我们创建了一种在该区域替换了一个氨基酸的病毒，并揭示了丙型肝炎病毒和瘟病毒分别用于产生颗粒的宿主载脂蛋白和病毒蛋白Erns可以补偿黄病毒颗粒生产。。上述结果表明，分泌型糖蛋白对于黄病毒科病毒的颗粒产生至关重要，并且它们具有共同的功能。 2.我们建立了一种利用携带新型报告基因的黄病毒科病毒评估蛋白的结构和特性来选择合适的外源基因插入位点的方法。进一步发现，该方法产生的报告病毒在生物体中表现出与亲本株相同的致病性，并且可以根据荧光素酶活性值来评估病毒的增殖能力。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Characterization of recombinant Flaviviridae viruses possessing a small reporter-tag.

具有小报告标签的重组黄病毒科病毒的表征。

DOI：
10.1128/jvi.01582-17
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tamura T; Fukuhara T; Uchida T; Ono C; Mori H; Sato A; Fauzyah Y; Okamoto T; Kurosu T; Setoh YX; Imamura M; Tautz N6 Sakoda Y; Khromykh AA; Chayama K; Matsuura Y.
通讯作者：
Matsuura Y.

The roles of secretory glycoproteins in viral particle formation in family Flaviviridae

分泌糖蛋白在黄病毒科病毒颗粒形成中的作用

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomokazu Tamura; Takasuke Fukuhara; Mai Shiokawa; Chikako Ono; Satomi Yamamoto; Hiroyuki Mori; Takeshi Kurihara; Toru Okamoto; Hiroshi Aoki; Yoshihiro Sakoda;Yoshiharu Matsuura
通讯作者：
Yoshiharu Matsuura

Induction of selective autophagy in cells replicating hepatitis C virus genome

复制丙型肝炎病毒基因组的细胞中选择性自噬的诱导

DOI：
10.1099/jgv.0.001161
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
3.8
作者：
Mori Hiroyuki;Fukuhara Takasuke;Ono Chikako;Tamura Tomokazu;Sato Asuka;Fauzyah Yuzy;Wada Masami;Okamoto Toru;Noda Takeshi;Yoshimori Tamotsu;Matsuura Yoshiharu
通讯作者：
Matsuura Yoshiharu

フラビウイルス科ウイルスの粒子産生における分泌性糖タンパク質の役割

分泌糖蛋白在黄病毒科病毒颗粒产生中的作用