１型糖尿病におけるＴＲＰＡ１，ＴＲＰＭ２チャネル関与の検討

TRPA1 和 TRPM2 通道参与 1 型糖尿病的检查

基本信息

批准号：
13F03795
负责人：
富永真琴
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Okazaki Research Facilities, National Institutes of Natural Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13F03795/
关键词：
生理学神経科学膵臓 1型糖尿病 TRPチャネル TRPM8 TRPA1

项目摘要

マウス単離唾液腺房細胞の培養系において、TRPV4と ANO1が複合体を形成していることを共免疫沈降実験で確認した。マウス単離唾液腺房細胞でカルシウムイメージング法を用いて、TRPV4刺激剤による細胞内カルシウム濃度の上昇とそれにともなう細胞容積の縮小を観察した。このTRPV4刺激剤による細胞内カルシウム濃度の上昇と細胞容積の縮小は細胞外カルシウム依存的であり、TRPV4欠損マウスから調整した単離唾液腺房細胞では観察されなかったことから、TRPV4を介して流入したカルシウムによってANO1が活性化してクロライドイオン流出が水の流出（細胞容積縮小）を惹起しているものと考えられた。加えて、細胞内140mM CsCl、細胞外140 mM NaClの条件下で全細胞型パッチクランプ法によって外向き整流性を示す電流の活性化が観察された。この電流は、TRPV4阻害剤で完全に抑制されたことから、TRPV4の活性化を介して起こっていると考えられた。また、細胞内外140 mM NMDG条件下では、TRPV4刺激剤で外向き整流性を示すクロライド電流の活性化が観察された。こうした実験から、TRPV4活性化によって流入したカルシウムによってANO1が活性化したものと結論した。マウス唾液線からのアセチルコリン刺激による唾液分泌がTRPV4阻害剤で抑制された。マウス単離涙腺房細胞培養系も確立し、アセチルコリンのみならずTRPV4刺激剤で細胞内カルシウム濃度の上昇が観察された。マウス眼からの涙分泌量を測定し、アセチルコリンによる涙分泌がTRPV4阻害剤で抑制された。よって、TRPV4/ANO1機能連関によって涙腺房細胞から水分（涙）の流出が起こっているものと推定した。このように、唾液腺、涙腺での唾液、涙分泌にTRPV4/ANO1機能連関が関わっていることが明らかになった。

在小鼠分离的唾液腺泡细胞培养体系中，我们通过免疫共沉淀实验证实TRPV4和ANO1形成复合物。通过对小鼠分离的唾液腺泡细胞进行钙成像，我们观察到 TRPV4 刺激剂导致细胞内钙浓度增加，并伴随细胞体积减少。这种TRPV4刺激剂引起的细胞内钙浓度的增加和细胞体积的减少依赖于细胞外钙，并且在从TRPV4缺陷小鼠制备的分离的唾液腺泡细胞中没有观察到，这表明流入是通过TRPV4发生的。 ANO1被钙激活，氯离子流出导致水流出（细胞体积减少）。此外，在细胞内140mM CsCl和细胞外140mM NaCl条件下，通过全细胞膜片钳法观察到外向整流电流的激活。该电流被TRPV4抑制剂完全抑制，表明它是通过激活TRPV4而发生的。此外，在细胞内和细胞外 140 mM NMDG 条件下，用 TRPV4 刺激器观察到外向整流氯电流的激活。从这些实验中，我们得出结论，由于 TRPV4 激活，ANO1 被钙内流激活。 TRPV4 抑制剂抑制乙酰胆碱刺激的小鼠唾液腺唾液分泌。还建立了小鼠离体泪腺腺泡细胞培养系统，不仅观察到乙酰胆碱而且使用TRPV4刺激剂时细胞内钙浓度增加。测量了小鼠眼睛的泪液分泌量，并通过TRPV4抑制剂抑制了由乙酰胆碱引起的泪液分泌。因此，我们假设水（眼泪）从泪腺腺泡细胞流出是由于 TRPV4/ANO1 功能相互作用而发生的。因此，已经揭示TRPV4/ANO1功能关系涉及唾液腺和泪腺中的唾液和泪液分泌。