ウシの免疫抑制受容体の機能解析および難治性疾病の新規制御法への応用研究

牛免疫抑制受体功能分析及疑难病防治新方法的应用研究

基本信息

批准号：
13J01442
负责人：
岡川朋弘
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ウシの免疫抑制受容体PD-1やLAG-3に対する分子標的薬を開発し、ウシ白血病ウイルス（BLV）感染症やヨーネ病をはじめとした難治性疾病に対する新規制御法を樹立することを目的としている。まず、昨年度までに樹立した発現細胞株を用いて、抗ウシPD-1治療用抗体および抗ウシLAG-3治療用抗体の大量生産を試みた。この結果、14 mgの抗PD-1抗体を産生させることに成功した。また、抗LAG-3抗体についても大量生産を現在進めている。次に、作製した抗PD-1治療用抗体の機能を評価した。まず、この治療用抗体のPD-1に対する結合親和性は、基にした抗PD-1ラット抗体と同等であることがわかった。また、この治療用抗体はPD-1とリガンドであるPD-L1の結合を阻害するブロック抗体の機能を示した。さらに、BLV感染牛を用いて抗ウシPD-1治療用抗体の臨床試験を実施した。抗PD-1治療用抗体を感染牛に投与し、その後の経過を観察した。抗体投与後、試験牛には特筆すべき臨床症状は認められなかった。また、投与した抗体は少なくとも投与後28日まで血清中から検出され、長い血中半減期を有することが示唆された。そして、抗PD-1抗体の投与によりBLV特異的CD4+ T細胞応答が活性化され、抗ウイルス効果が認められた。このように、抗ウシPD-1治療用抗体がBLV感染症の発症遅延に有効な治療薬となりうることが示唆された。また、本年度はこの他に、本制御法の適応範囲を広げるため、牛のアナプラズマ病における免疫抑制受容体の発現動態と機能を解析し、アナプラズマ病におけるT細胞の疲弊化にPD-1とLAG-3の発現上昇が関与することを示した。

这项研究旨在开发用于牛免疫抑制受体PD-1和LAG-3的分子靶向药物，并为诸如牛白血病病毒（BLV）感染和Jone病等顽固性疾病建立新的控制方法。首先，我们尝试使用直到去年建立的明确的细胞系进行抗菌PD-1和抗癌滞后3处理的抗体。结果，成功产生了14 mg的抗PD-1抗体。我们目前还正在努力大规模生产抗LAG-3抗体。接下来，评估了制备的抗PD-1治疗抗体的功能。首先，发现该治疗抗体的PD-1的结合亲和力与碱基抗PD-1大鼠抗体的结合亲和力相当。此外，该治疗性抗体证明了封闭抗体的功能，该抗体抑制了PD-1与配体PD-L1的结合。此外，使用BLV感染的母牛进行了抗牛PD-1处理抗体的临床试验。对感染的母牛施用抗PD-1治疗抗体，并观察到随后的进展。给药抗体后，在测试奶牛中未观察到明显的临床症状。此外，至少在给药后28天之前，在血清中检测到施用的抗体，这表明它们的血液中有很长的半衰期。抗PD-1抗体的施用激活了BLV特异性CD4+ T细胞反应，并观察到抗病毒作用。因此，已经提出，抗牛PD-1治疗抗体可以是延迟BLV感染发作的有效治疗剂。此外，为了扩大这种调节方法的范围，我们分析了牛在牛中肿瘤中免疫抑制受体的表达动力学和功能，表明PD-1和LAG-3的表达升高与肿瘤中T细胞的耗尽有关。