ニホンウナギの回遊遺伝子単離に向けた分子遺伝学的研究

日本鳗鱼洄游基因分离的分子遗传学研究

• 批准号: 13J05845
• 负责人: 須藤 竜介
• 金额: $ 1.62万
• 依托单位: Tokyo University of Marine Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J05845/
• 关键词: ニホンウナギ; 変態; レプトセファルス; 遺伝マーカー; 親子鑑定; 分子遺伝学的解析; 姉妹交配; シラスウナギ; マイクロサテライトマーカー; マルチプレックスPCR

回遊に密接に関わるレプトセファルスからシラスウナギへの変態に着目し、変態の早さに関連する遺伝マーカーの探索のための解析基盤の構築を行った。具体的には、以下の3つの研究を実施した。(1) 解析材料となる家系の作出：完全養殖第2世代のウナギの中で変態の早かった家系の姉妹交配により作出された家系を解析家系とした。変態が開始した個体は変態日数を記録し、DNA解析用にエタノール中に保存した。以上から、変態日数解析用個体77個体のサンプリングが完了した。(2) 遺伝マーカーの探索の基盤構築：解析個体からのDNA抽出はQuick geneを用いて行い、遺伝学的解析はGBS（Genotyping by sequencing）解析を適用した。解析の結果、雄親から19,386,060 reads、雌親から24,068,238 reads、子供からは平均3,586,950 readsのデータを取得した。データはCLCにてクオリティチェックおよび制限高所配列のトリミングを行った後、stacksにてアリルを探索した。その結果、742010個のアリルがコールされた。(3) 育種研究の基盤ツールである親子鑑定系の確立：雌親魚5個体と雄親魚15個体を自然交配させた集団を解析家系とし、日齢2日の153個体と日齢30日の148個体を解析に供した。ヘテロ接合度と多型情報含有値の高い8つのマイクロサテライトマーカーを選定し、マルチプレックスPCR法により全マーカーを同時に増幅させ、多型解析を実施した。計301個体のうち297個体の親子のペアを判別でき、鑑定率は98.7%と高い精度の親子鑑定法を確立できた。以上の研究を通じて、変態に関する遺伝的解析基盤の構築するとともに、育種に向けた基礎ツールの確立もできた。

侧重于与迁移密切相关的瘦脑的变形，与白鳗鱼密切相关，我们为寻找与变质速度相关的遗传标记构建了一个分析基础。具体而言，进行了以下三项研究：（1）创建作为分析材料的家庭：一个由一个家庭姐妹育种产生的家庭，该家庭在第二代鳗鱼中快速形成的家族（已充分耕种）是分析家族。记录了开始变态的个体，并存储在乙醇中进行DNA分析。由此，已经完成了77个以用于分析变态日的个体。 （2）建立搜索遗传标记的基础：使用快速基因进行从分析个体中提取DNA，并通过GBS（通过测序）分析应用遗传分析。分析表明，数据的平均为19,386,060次，来自男性父母的读物，24,068,238次读物，女性父母的读数平均为3,586,950读。数据是质量检查，并使用CLC修剪了限制高度阵列，然后使用堆栈搜索等位基因。结果，调用了742,010个等位基因。 （3）建立亲子测试系统，这是一种用于育种研究的基本工具：分析家族是一个自然交配的五个雌性和15只雄性和15只雄性和15个雄性鱼类，而在2天的2天中，有153个人分析了30天的148个人。选择了八个具有高杂合性和多态性信息含量的微卫星标记，并通过多重PCR同时扩增所有标记，并进行了多态性分析。在总共301个人中，有297对亲子对能够区分297个人，评估率为98.7％，并建立了高度准确的亲子评估方法。通过上述研究，我们能够为变形的遗传分析建立基础，并为育种建立基本工具。

项目成果

DNAマーカーを用いたニホンウナギの 親子鑑定法

使用DNA标记的日本鳗鱼亲子鉴定方法

• 发表时间: 2015
• 作者: 宮尾萌莉;須藤竜介;山田祥朗;坂本崇;塚本勝巳.
• 通讯作者: 塚本勝巳.

ニホンウナギの産卵回遊開始機構における11-KTの役割

11-KT在日本鳗鱼产卵洄游启动机制中的作用

• 发表时间: 2013
• 作者: 須藤竜介;塚本勝巳
• 通讯作者: 塚本勝巳