変異導入受容体を利用したプロスタノイド受容体リガンド認識構造の解明

使用突变受体阐明前列腺素受体配体识别结构

基本信息

批准号：
09670125
负责人：
牛首文隆
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Asahikawa Medical College (1998)Kyoto University (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

分子構造から見るとプロスタグランジンは、プロスタン酸を基本骨格とし、五員環構造と側鎖の二重結合数によって分類される。即ち、五員環構造よりD,E,F,Iの4タイプとオキサン環を持つTXに分類される。各プロスタノイドが非常に似通つた構造を持つにもかかわらず、各プロスタノイド受容体は全体としてはその相同性が低い。しかし、プロスタノイド受容体はロドプシン型受容体ファミリーに属し、部分的にはプロスタノイド受容体サプファミリーとしての共通構造を持っている。本研究は、DP/IPキメラ受容体を用いた解析を行い、リガンド結合親和性を比較することにより、リガンドの特異的結合を決定する受容体領域の同定を試みた。その結果、初年度は受容体の第2〜3膜貫通領域がプロスタノイド分子の5員環を認識し、第6〜第7膜貫通領域が側鎖の二重結合の有無を識別することを明らかにした。次年度は、さらに細かく部位を限定したキメラ受容体を用いて解析を進めた。その結果、受容体の第2膜貫通領域が5員環の認識に重要であることを解明した。ついで、この部位でIP受容体とDP容体間で異なっている4個のアミノ酸に点変異を加えた受容体を作成し、解析を進めた。その結果、5員環の認識に重要な役割を果たすアミノ酸の同定に成功した。

从分子结构上看，前列腺素以前列腺酸为基本骨架，根据其五元环结构和侧链双键的数量进行分类。即，根据五元环结构分为D、E、F、I四种类型，以及具有氧杂环己烷环的TX。尽管每种前列腺素具有非常相似的结构，但每种前列腺素受体的总体同源性较低。然而，前列腺素受体属于视紫红质型受体家族，并且与前列腺素受体亚家族具有部分共同的结构。在本研究中，我们尝试通过使用 DP/IP 嵌合受体进行分析并比较配体结合亲和力来鉴定决定配体特异性结合的受体区域。结果，在第一年，受体的第二和第三跨膜区识别前列腺素分子的五元环，第六和第七跨膜区识别侧链中是否存在双键。揭示了。第二年，我们使用具有更精细区域的嵌合受体进行分析。结果，我们发现受体的第二跨膜区对于五元环的识别很重要。接下来，他们创建了一种受体，在该位点的IP受体和DP受体之间不同的四个氨基酸上添加了点突变，并进行了分析。结果，他们成功鉴定了一种在五元环识别中起重要作用的氨基酸。