Elucidation of biological significance of GABA receptors in extrasynaptic

突触外 GABA 受体的生物学意义的阐明

• 批准号: 22KJ2644
• 负责人: 貞光 謙一郎
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Aoyama Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2644/
• 关键词: GABA; glycine; GABA(A)受容体; glycine受容体; 抑制性シナプス伝達; ゼブラフィッシュ

抑制性シナプスには、五量体型のGABA受容体(GABAR)とglycine受容体(GlyR)が存在し、抑制性神経伝達を担う。GABAR subunitとGlyR subunitから成るhybrid受容体が存在し、GABAとglycineそれぞれに応答するかを明らかにするために研究を進めた。先行研究を基に、GABAR subunitでは23種類のうち、GABARa1,GABARb3,GABAg2を、GlyR subunitでは7種類のうち、GlyRa1, GlyRbbのcRNA合成をそれぞれ単独に行った。cRNAはさまざまな組み合わせでXenopusの卵母細胞にinjectionすることで卵母細胞膜表面上に複数パターンのsubunitを発現させた。膜表面上に発現したsubunitは、二電極式ボルテージクランプ法による電流記録を行うことで、GABAやglycineへの開口特性を評価し、hybrid受容体を形成するか確認した。まずは、GABARb3とGABARg２とGlyRa1を共発現させると、それぞれGABAとglycine両方の暴露により開口が見られた。しかし、GABARb3とGABARg2から構成される受容体はGABA暴露で、GlyRa1のみから構成される受容体はglycine暴露で開口することから、それぞれGABAとglycine両方の暴露に応答するhybrid受容体を評価できたと断言できない。この問題点を解決するために今後は、GABARb3とGABARg2のhetero五量体発現抑止及びGlyRa1のhomo五量体発現抑止のために、GABARb3とGlyRa1のsubunitを連結させたconcatemerをクローニングする。合成したconcatemerはGABARg2と共発現させ、GABAとglycine両方に対して応答するかを検証する。

抑制性突触包括负责抑制性神经传递的五聚体GABA受体（GABAR）和甘氨酸受体（GLYR）。进行研究以确定是否存在由Gabar亚基和Glyr亚基组成的混合受体，并分别对GABA和甘氨酸做出反应。基于先前的研究，在Gabar亚基中进行了23种类型的Gabara1，Gabarb3和Gabag2的CRNA合成，在Glyr亚基中进行了7种类型的Glyra1和GlyRBB的CRNA合成。将CRNA注入各种组合中的爪蟾卵母细胞中，以表达卵母细胞膜表面的多种亚基。通过使用两电极电压夹法的电流记录记录在膜表面表达的亚基，并评估了对GABA和甘氨酸的孔径特性，以确认它们是否形成混合受体。首先，当Gabarb3，gabarg2和Glyra1共表达时，由于暴露于GABA和甘氨酸，观察到开口。但是，由于由GABARB3和GABARG2组成的受体暴露于GABA，并且仅通过甘氨酸暴露而开放的受体，因此不能说分别对GABA和GABA和甘氨酸暴露的混合受体可以进行评估。为了解决这个问题，将链接Gabarb3和Glyra1的亚基的辅导者，以抑制Gabarb3和Gabarg2和Gabarg2的杂音五聚体表达以及Glyra1的同型五聚体表达。合成的incatemer与gabarg2共表达，并验证它是否对GABA和甘氨酸做出反应。

项目成果

全ゲノムシーケンスを用いたゼブラフィッシュ野生型系統の多様性評価

使用全基因组测序评估斑马鱼野生型品系的多样性

• 发表时间: 2022
• 作者: 貞光 謙一郎;鹿島 誠;石岡 亜季子;中山 里実;中山 涼子;岡本 仁;平田 普三
• 通讯作者: 平田 普三

Wild-type lines and new inbred strains of zebrafish evaluated by whole genome sequencing

通过全基因组测序评估斑马鱼野生型系和新近交系

• 发表时间: 2022
• 作者: Sadamitsu;K.;Kashima;M.;Shinya;M.;Ashida;H.;Ishioka;A.;Nakayama;S.;Nakayama;R.;Okamoto;H.;Sakai;N. and Hirata;H.
• 通讯作者: H.