性フェロモン構成成分およびDNA塩基配列比較によるキンウワバ亜科の系統解析

通过比较性信息素成分和 DNA 碱基序列对 Corinthinae 亚科进行系统发育分析

基本信息

批准号：
08760041
负责人：
野村昌史
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

フェロモン成分の同定により、形態的には極めて近縁とされるキクキンウワバとネッタイキクキンウワバについては主成分が異なるという強い生殖隔離が明らかとなった。また野外でのフェロモントラップによる誘引試験を北海道、関東、沖縄で行ったところ、混生している沖縄地方においても両種が同じ成分に誘引されることはなく、強い生殖隔離が確認された。更にアロザイムやミトコンドリアDNAの制限酵素断片長多型といった生化学的手法を用いて両種の類縁関係を検討したこところ、やはり遺伝的に大きく異なるという結果が得られた。チトクロームオキシダーゼ領域の塩基配列比較については、PCR産物のダイレクトシークエンスを行い、大腸菌を用いてのクローニングは行わずに研究を進めた。より簡便な手法により個体数・種類数を増やすためであり、個体数を多くすることによって塩基配列の確認を行った。PCR産物にイソプロパノールと酢酸アンモニウムを併用した処理を行い、シークエンスを行ったところ、300〜500塩基の配列を明らかにすることができた。これまでに明らかとなっているショウジョウバエなどの領域と比較したところ、確かに目的の領域の一部の配列を示していることが確認された。試薬などの関係でこれ以上の配列を確認することができなかったが、種間の比較については変異が蓄積している領域であったため、解析を行うことができた。キンウワバ類5種の配列を比較検討したところ、キクキンウワバとネッタイキクキンウワバが配列が異なる傾向が見られ、これまでの生化学的手法の結果および本研究によるフェロモン成分の結果を支持した。以上得られた成果について学会の大会で報告を行う予定である。今後は更に多くの種のフェロモン成分を明らかにするとともに、DNA塩基配列情報を蓄積し、亜科内の種の分子系統学的研究を行っていく予定である。

信息素成分鉴定表明，形态上密切相关的埃及伊蚊和埃及伊蚊之间具有很强的生殖隔离性，但主要成分不同。此外，在北海道、关东和冲绳进行使用信息素诱捕器的野外吸引试验时发现，即使在它们共存的冲绳地区，两种物种也不会被相同的成分所吸引，证实了强烈的生殖隔离。此外，当我们使用等位酶和线粒体DNA限制性片段长度多态性等生化技术研究这两个物种的相关性时，我们发现它们在遗传上存在显着差异。关于细胞色素氧化酶区域的核苷酸序列比较，我们对PCR产物进行了直接测序，并继续进行研究，而不使用大肠杆菌进行克隆。目的是用更简单的方法增加个体数量和类型，通过增加个体数量来确认核苷酸序列。当 PCR 产物用异丙醇和乙酸铵的组合处理并测序时，显示了 300 至 500 个碱基的序列。与先前鉴定的果蝇和其他生物体的区域进行比较，证实该序列确实代表了所需区域的一部分。尽管由于试剂的原因我们无法确认任何进一步的序列，但我们能够进行种间比较，因为这是突变积累的区域。当我们比较五种天蛾的序列时，发现埃及伊蚊和埃及伊蚊的序列趋于不同，这支持了之前的生化方法的结果和本研究关于信息素成分的结果。我们计划在学术会议上报告上述结果。未来，我们计划阐明更多物种的信息素成分，积累DNA序列信息，并对亚科内的物种进行分子系统发育研究。