B細胞におけるCD14発現の検討

B细胞中CD14表达的检查

• 批准号: 09877345
• 负责人: 浜田 茂幸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877345/
• 关键词: LPS; CD14; B細胞; RT-PCR; Northern blot; フローサイトメトリー

グラム陰性菌の外膜に存在するリポ多糖(lipopolysaccharide:LPS)はB細胞をはじめ種々の生体細胞に対して強い生物学的活性を有するが,生体細胞側のLPS受容体に関しては不明な点が数多く残されている.単球/マクロファージにおいては,細胞表面のCD14が,血清中のLPS結合蛋白(LBP)と結合したLPS,すなわちLPS-LBP複合体に対する受容体として働くことが明らかにされているが,リンパ系細胞,特にB細胞での発現については明らかではない.本研究では,マウスB細胞由来培養細胞株CH12.LX,種々のマウスmyelona細胞株および精製マウス脾臓B細胞を用いて,B細胞でのCD14発現について検討を行った.その結果,マウスマクロファージで報告されているCD14に特異的なプライマーを用いたRT-PCR法およびNorthernblot法の成績から,CH12.LXにおいてCD14mRNAの発現が認められた.さらに,このCD14mRNAのcDNAのシークエンスの結果は,マクロファージで報告されているCD14遺伝子のそれと完全に一致した.しかし陽性対照のマクロファージ由来株化細胞であるJ774.1と比較して,CH12.LXでのCD14mRNAの発現程度は低いことが明らかとなった.CH12.LXにおける細胞表面へのCD14分子の発現については,抗マウスCD14モノクローナル抗体を用いてフローサイトメトリーにより解析した結果,mRNAレベルでの成績に一致して,CH12.LXの細胞表面にCD14分子が発現していること,しかしその発現程度はJ774.1と比較して低いことが認められ,少なくとも特定のB細胞株においてはCD14分子が発現することが明らかとなった.しかし,今回調べたかぎりにおいては,マウスmylona細胞株および精製BALB/cマウス脾臓B細胞での細胞内のCD14mRNA発現および細胞表面上でのCD14分子の発現はともに認められなかった.

脂多糖（LPS）存在于革兰氏阴性菌的外膜中，对包括B细胞在内的多种活细胞具有很强的生物活性，但关于活细胞上的LPS受体仍存在许多未知点。在单核细胞/巨噬细胞中，细胞表面的CD14已被证明可充当与血清中的LPS结合蛋白（LBP）结合的LPS受体，即LPS-LBP复合物系统细胞； B 细胞上的表达尚不清楚。在本研究中，我们使用小鼠 B 细胞来源的培养细胞系 CH12.LX、各种小鼠骨髓细胞系和纯化的小鼠脾 B 细胞研究了 B 细胞上的 CD14 表达。 。结果，基于RT-PCR和使用CD14特异性引物的Northern印迹的结果，在CH12.LX中观察到了CD14 mRNA的表达，这已在小鼠巨噬细胞中报道过。 CD14 mRNA 的 cDNA 测序结果与巨噬细胞中报道的 CD14 基因完全匹配，然而，与阳性对照巨噬细胞来源的细胞系 J774.1 相比，结果显示CD14 mRNA的表达水平较低。使用抗小鼠CD14单克隆抗体通过流式细胞术分析CH12.LX细胞表面CD14分子的表达。与细胞水平的结果一致，观察到CD14分子在CH12.LX的细胞表面表达，但表达水平低于J774.1，至少在某些B细胞系中是这样的。表达的然而，就我们这次的研究而言，在小鼠mylona细胞系和纯化的BALB/c小鼠脾B细胞中均未观察到细胞内CD14 mRNA表达和细胞表面CD14分子表达。