DNA修復経路を決定づける情報伝達機構の解析

决定DNA修复途径的信息传递机制分析

• 批准号: 12J06018
• 负责人: 成田 岳雄
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J06018/
• 关键词: DNA修復; 複製後修復; ユビキチン経路; DNA損傷応答; 相同組換え; ユビキチン

A. DNA修復においてはユビキチン経路が修復因子の集積、活性化の調節をする上で重要な役割を果たしている。本研究ではユビキチンE3リガーゼRNF8とRNF168について、互いの協調した働き及び独立した働きを明らかにした。1. 相同組換え修復におけるRNF8非依存的なRNF168の働きの解明相同組換えの初期過程においてRNF8, RNF168は協調して働いており、トリB細胞株DT40においてRNF8, RNF168の変異株はカンプトテシンやParp阻害剤に対してエピスタティックな感受性を示す(1年度目の報告)。しかし、Rad51のDNA損傷部位への集積動態から、RNF168と異なりRNF8はRad51ヌクレオフィラメントの形成には関与せず、その後の相同鎖探索の過程において相同組換えに働いている可能性が示唆された。2. 複製後修復におけるRNF168およびRNF8の働きの解明複製後修復機能の解析結果から、RNF8とRNF168が同じ基質に異なるトポロジーのユビキチン鎖を竸合的に付加し、基質の分解と集積を制御していることが示唆された(1年度目の報告)。基質を探索する目的で野生株及びRNF8変異株において複製ブロック部位に集積するタンパク質をMS解析で比較した。B. DT40細胞株の標的組換え効率が高い機構の解明DT40細胞は高頻度で標的組換えを行うことのできる唯一の高等生物細胞株である。しかし、その機構は分かっていない。本研究ではRNA-seqによりDT40細胞株とトリT細胞由来39CU細胞株、ヒトBおよびT細胞との転写プロファイルを比較することで、DT40細胞において標的組換えに寄与している因子を探索した。その結果DT40では、減数分裂時の組換え時に働く遺伝子群が高発現していることがわかり、これらがDT40の組換え機能に寄与している可能性が示唆された。

A. 在DNA修复中，泛素途径在调节修复因子的积累和激活中发挥着重要作用。在本研究中，我们阐明了泛素E3连接酶RNF8和RNF168的协同和独立功能。 1.阐明RNF168在同源重组修复中独立于RNF8的作用RNF8和RNF168在同源重组的早期过程中协同工作，禽B细胞系DT40中RNF8和RNF168的突变株对Parp抑制剂表现出上位敏感性（第一年报告）。然而，Rad51在DNA损伤位点的积累动态表明，与RNF168不同，RNF8不参与Rad51核丝的形成，但可能在随后寻找同源链的过程中在同源重组中发挥作用。 2、阐明RNF168和RNF8在复制后修复中的作用基于复制后修复功能的分析结果，RNF8和RNF168联合在同一底物上添加不同拓扑结构的泛素链，控制泛素链的降解和积累。基材（第一年报告）。为了寻找底物，我们通过MS分析比较了野生型菌株和RNF8突变菌株中复制块位点积累的蛋白质。 B.阐明DT40细胞系高效靶向重组背后的机制DT40细胞是高等生物中唯一能够高频率进行靶向重组的细胞系。然而，其机制尚不清楚。在这项研究中，我们通过使用 RNA-seq 比较 DT40 细胞系、禽类 T 细胞衍生的 39CU 细胞系以及人类 B 和 T 细胞的转录谱，研究了促成 DT40 细胞靶向重组的因素。结果显示，在DT40中，一组在减数分裂重组过程中起作用的基因高表达，表明这些基因可能有助于DT40的重组功能。