In vitro免疫法とパッチクランブ法を用いた歯髄細胞の生体警告系の解析

体外免疫和膜片钳法分析牙髓细胞生物预警系统

• 批准号: 08877285
• 负责人: 池田 英治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877285/
• 关键词: 象牙芽細胞; モノクローナル抗体; パッチクランブ法; 歯髄; in vitro 免疫法; パッチクランプ

1.象牙芽細胞標識モノクローナル抗体象牙芽細胞をラベルするモノクローナル抗体の産生に成功した(IgG3種とIgM1種)。これらモノクローナル抗体のラベリングの局在を透過型電子顕微鏡レベルで解明しようと試み、3種で成功した。IgG抗体(1)は象牙芽細胞の細胞質全域を;IgG抗体(2)は表面マーカーで、細胞膜のみをラベルした。IgG抗体(4)は象牙芽細胞細胞質、dendritic cell細胞質、血管内皮細胞細胞質を染めることを明らかにした。これらの抗体を用いて単離歯髄細胞中で象牙芽細胞を科学的に同定することができるようになった。2.象牙芽細胞膜の電気生理学的特性最適細胞外液をはじめ新鮮単離象牙芽細胞を長く生かす方法を検討した。その結果、電極内をHEPE溶液に電極外をりん酸緩衝液(オスモラリティー325)が最適であった。この後、ギガΩレベルのシールを獲得し、シングルチャンネル記録を行った。陰圧あるいは電気ショックを用いても、タフな象牙芽細胞の細胞膜に穿孔することはできなかった。そこで、ナイスタチンを用いて化学的に象牙芽細胞に穿孔し、細胞全体からの記録を可能にした。I-V関係はほぼ直線で、電位依存性のチャンネルは検出できなかった。3.象牙芽細胞膜と他の細胞とのcoupling歯髄細胞を単離すると希に象牙芽細胞と別の細胞がくっついて分離されることがある。一方(象牙芽細胞)にガラス微小電極を介して、低分子の色素を注入すると他の細胞(樹状の細胞)に色素が広がることがわかった。象牙芽細胞は別の細胞と機能的に結合している可能性が示された。

1。烯型细胞标记的单克隆抗体，我们成功地产生了标记Odontoblasts（IgG3和IgM1种）的单克隆抗体。我们试图阐明这些单克隆抗体在透射电子显微镜水平上的标记定位，三种类型成功。在整个Odontoblasts的细胞质中标记了IgG抗体（1）。 IgG抗体（2）是表面标记，仅标记细胞膜。据揭示，IgG抗体（4）染色牙糖细胞细胞质，树突状细胞质和内皮细胞细胞质。这些抗体现已用于科学地鉴定分离的纸浆细胞中的牙糖细胞。 2。ODONTOBAST膜的电生理特性，我们研究了充分利用新鲜分离的Odontoblast细胞（包括细胞外液）的方法。结果，磷酸盐缓冲液（渗透压325）在电极内部和电极外部最佳使用。此后，获得了GIGAΩ级密封，并执行单个通道记录。使用负压或电击不允许穿孔进入坚硬的牙胶细胞膜。因此，黑藻蛋白被用来化学化化学细胞细胞，从而从整个细胞中记录。 I-V关系几乎是线性的，无法检测到电压依赖性通道。 3。当分离出牙髓细胞时，将牙胶细胞膜与其他细胞偶联，牙糖细胞和其他细胞有时可以通过粘在一起来分离。另一方面，发现小分子染料通过玻璃微电极注入牙胶细胞时，染料会扩散到其他细胞（树突状细胞）。结果表明，Odontoblasts可以在功能上与另一个单元格结合。

项目成果

Ikeda H.et al.: "Patch-clamp recording from cat pdontoblasts identified with monoclonal anti bodies" J.dent.Res.76(Spec Iss). 171-171 (1997)

Ikeda H.等人：“用单克隆抗体鉴定的猫成牙本质细胞的膜片钳记录”J.dent.Res.76(Spec Iss)。

H,Ikeda et al.: "Capsaicin sensitive As fibers in cat tooth pulp" J,dent Res.(in press).

H，Ikeda 等人：“猫牙髓中的辣椒素敏感纤维”J，dent Res.（印刷中）。

Ikeda H.et al.: "Monoclonal antibodies to odonto blasts raised by in vitro immunzation" Dentin/Pulp Complex. 325-326 (1996)

Ikeda H.等人：“体外免疫产生的针对牙本质细胞的单克隆抗体”牙本质/牙髓复合物。

山本寛. 池田英治ら: "痛みのメカニズム4,象牙質知覚過敏症" 歯界展望. 89(1). 147-160 (1997)

Hiroshi Yamamoto. Eiji Ikeda 等人：“疼痛机制 4，牙本质过敏”Dental Perspective 89(1)。

池田英治ら: "痛みのメカニズム5,口腔顔面領域の痛み" 歯界展望. 89(3). 665-678 (1997)

Eiji Ikeda 等人：“疼痛机制 5，口面部疼痛”Dental Perspective 89(3) 665-678 (1997)。