天然食品成分による口腔癌幹細胞抑制メカニズムの解析：効果的口腔癌治療を目指して

天然食品成分抑制口腔癌干细胞机制分析：瞄准口腔癌有效治疗

基本信息

批准号：
22K10156
负责人：
福田正勝
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Meikai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10156/
关键词：
口腔癌 p53 CD44 c-Met 細胞死ポリフェノールピセアタンノール(PIC)癌幹細胞

项目摘要

5例の口腔扁平上皮癌患者の生検組織ホルマリン固定パラフィン包埋材料について、HE染色標本にて病理診断した後、CD44、c-Met、NF-kBに対する抗体を用いた免疫組織化学的検索を行い、その発現強度および局在を確認した。その結果、5例全例の腫瘍細胞の細胞膜にCD44およびc-Metタンパク質の陽性反応を、腫瘍細胞の核および細胞質にNF-kBの強陽性反応を認めた。5種のヒト口腔癌細胞株におけるc-Met、CD44、NF-kB遺伝子とタンパク質の発現状況を定量性RT-PCR法とWestern blot法にて確認した。その結果、各細胞株においてc-Met、CD44、NF-kB mRNAの構成的な発現を示した。また、SAS細胞において最も強いc-Met mRNAとタンパク質発現量を示した。CD44 mRNAとタンパク質発現量はSAS細胞とHSC-3細胞において他よりも強かった。5種の口腔癌細胞株におけるCD44およびc-Metタンパク質の発現プロファイルをフローサイトメトリーにて解析したところ、同様の結果を得た。次に、SASとHSC-3細胞におけるCD44、c-Met mRNAの発現をsmall interfere (si) RNAを用いてノックダウンしたところ、両細胞の増殖活性は明らかに抑制され細胞数は減少した。また、いずれのノックダウンにおいてもカスパーゼ-3/7、-9の活性化が起こり、アポトーシスが誘導された。以上の結果から、 p53遺伝子変異株であるSAS細胞およびHSC-3細胞において、癌幹細胞のマーカーであるCD44およびc-Metがその増殖活性に重要な働きを担っていることが示唆された。次に、ポリフェノールのピセアタンノール(PIC)を濃度を変えて24時間作用させた時の細胞状態の変化について解析したところ、いずれの細胞も10マイクロモルのPICにて細胞死が誘導された。

取5例口腔鳞状细胞癌患者的活检组织福尔马林固定石蜡包埋材料，采用HE染色标本进行病理学诊断，然后使用抗CD44、c-Met和NF-kB抗体进行免疫组织化学检查的表达强度和表达强度。本地化得到确认。结果，在所有5例肿瘤细胞的细胞膜中均观察到CD44和c-Met蛋白的阳性反应，并且在肿瘤细胞的细胞核和细胞质中观察到NF-kB的强阳性反应。使用定量 RT-PCR 和 Western blot 证实了五种类型的人口腔癌细胞系中 c-Met、CD44 和 NF-kB 基因和蛋白的表达状态。结果，每个细胞系均显示出 c-Met、CD44 和 NF-kB mRNA 的组成型表达。此外，SAS 细胞表现出最强的 c-Met mRNA 和蛋白质表达水平。 SAS 细胞和 HSC-3 细胞中的 CD44 mRNA 和蛋白表达水平高于其他细胞。当通过流式细胞术分析五种口腔癌细胞系中 CD44 和 c-Met 蛋白的表达谱时，得到了类似的结果。接下来，当我们使用小干扰（si）RNA敲低SAS和HSC-3细胞中CD44和c-Met mRNA的表达时，两种细胞的增殖活性均明显受到抑制，细胞数量减少。此外，在所有敲低的情况下，都会发生 caspase-3/7 和 -9 的激活，并诱导细胞凋亡。上述结果提示肿瘤干细胞标志物CD44和c-Met在p53基因突变型SAS细胞和HSC-3细胞的增殖活性中发挥重要作用。接下来，我们分析了当施加不同浓度的多酚白皮杉醇（PIC）24小时时细胞状态的变化，并且在10微摩尔的PIC下所有细胞均诱导细胞死亡。