Explore the effects of laser in vital pulp therapy using epigenetics analysis

利用表观遗传学分析探讨激光在活髓治疗中的作用

基本信息

批准号：
22K10020
负责人：
横瀬敏志
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Meikai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

これまでに、10週齢のメスSDラットの下顎切歯から酵素法で分離した歯髄培養細胞を用いて、半導体レーザー（波長808nm)を0.5W, 120J, エネルギー密度15J/cm2で照射し、その後の歯髄培養細胞に対してDspp,BGgp Alp,のmRNA遺伝子発現に対する影響を調べた。培養開始後、３週間後に細胞からtotal RNAを抽出し、Real time PCRにて分析したとろころ、レーザー照射によって全ての遺伝子発現が非照射群に比較して有意に亢進することが確認された。さらに、象牙質形成の指標になる、石灰化結節の形成が同様に亢進したことにより、レーザー照射によって象牙芽細胞への分化が亢進することを確認できた。さらにこの亢進のメカニズムを調べる為に、Wnt10a, Lef-1とOxytocin receptorの関係を調べた。レーザー照射によってOxytocin receptorとWnt10aの遺伝子発現が亢進することが見出された。これはレーザー照射によって細胞分化に重要なウイントシグナルのカノニカル経路が刺激されたことを示している。さらにこれらのレーザー照射された歯髄培養細胞のDNAのメチル化をELISAで調べたところ、非照射群の歯髄培養細胞に比較してDNAのメチル化が有意に５０％増加していることが明らかとなった。この結果はレーザー照射によって象牙芽細胞への分化の亢進と象牙質形成に関連する遺伝子の発現が誘導されていることを示しており、さらにこの遺伝子発現の調整にDNAのメチル化すなわちエピジェネティクスが関連する可能性が明らかとなった。

迄今为止，我们使用酶法从 10 周龄雌性 SD 大鼠下颌切牙中分离培养的牙髓细胞，并用半导体激光（波长 808 nm）以 0.5 W、120 J 和能量照射它们。我们研究了 15 J/cm2 的密度对培养的牙髓细胞中 Dspp 和 BGgp Alp mRNA 基因表达的影响。培养开始三周后，从细胞中提取总RNA并通过实时PCR进行分析，证实与未照射组相比，激光照射显着增强了所有基因的表达。此外，作为牙本质形成指标的钙化结节的形成也同样得到增强，证实激光照射促进了成牙本质细胞的分化。此外，为了研究这种增强的机制，我们研究了 Wnt10a、Lef-1 和催产素受体之间的关系。研究发现，激光照射增强了催产素受体和Wnt10a的基因表达。这表明激光照射刺激了wint信号经典途径，这对于细胞分化很重要。此外，当通过ELISA检查这些经激光照射的牙髓培养细胞的DNA甲基化时，发现与未照射组的牙髓培养细胞相比，DNA甲基化显着增加了50％。这些结果表明，激光照射诱导促进成牙本质细胞的分化以及与牙本质形成相关的基因的表达，并且进一步表明DNA甲基化或表观遗传学参与基因表达的调节。的可能性