侵襲性歯周炎の原因遺伝子NOD2変異型の機能解析

侵袭性牙周炎基因 NOD2 变体的功能分析

• 批准号: 22K09996
• 负责人: 永田 有希
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09996/
• 关键词: 侵襲性歯周炎; 免疫応答; NOD2; 口腔内細菌

侵襲性歯周炎の原因遺伝子NOD2の5種類の変異型を293T細胞に導入し、細菌の構成因子であるlipopolysaccharide (LPS)、muramyl dipeptide (MDP)、慢性歯周炎の原因菌として知られるP. gingivalis (P.g.) および侵襲性歯周炎患者で高頻度に観察されるA. actinomycetemcomitans (A.a.) の細胞破砕液に対する免疫応答を確認した。その結果、MDPとP.g.菌、A.a.菌破砕液に対して何種類かのNOD2変異型で免疫応答の亢進が観察された。このような免疫亢進が、活性化したNOD2によるself-inductionの結果によるものであるかを確認するため、MDP添加後のNOD2発現量をwestern blotおよびRT-qPCRにて解析したところ、各変異型の定常時およびMDP添加後の時系列において、有意な発現量の差は確認されなかった。また、MDP添加後のNOD2の細胞内局在を免疫染色にて確認したところ、各変異型の定常時およびMDP添加後の時系列において、有意な違いは観察されなかった。各NOD2変異型と結合している因子を免疫沈降によって回収し、SPS-PAGEにて確認したところ、野生型と比較して、各変異型で異なるサイズのバンドは確認されなかった。以上のことから、NOD2変異型によって、NOD2の細胞内局在、発現量および相互作用する因子の種類には大きな変化は起きていないことと、免疫刺激に対する応答性には違いがみられることが確認された。

将导致侵袭性牙周炎的基因 NOD2 的五种突变型导入 293T 细胞中，并分离出细菌成分脂多糖 (LPS)、胞壁酰二肽 (MDP) 和 P（已知是慢性牙周炎的致病因子）。被引入 293T 细胞（P.g.）和 A. actinomycetemcomitans（A.a.），这在患有侵袭性牙周炎的患者中经常观察到。我们证实了对细胞裂解物的免疫反应。结果，在几种类型的 NOD2 突变体中观察到针对 MDP、P.g. 细菌和 A.a. 的免疫反应增强。为了证实这种免疫增强是否是由于激活的NOD2的自诱导作用，我们通过western blot和RT-qPCR分析了添加MDP后的NOD2表达水平，发现各突变型的表达水平没有显着差异。稳态与添加 MDP 后的时间序列之间的关系。此外，当通过免疫染色确认添加MDP后NOD2的细胞内定位时，在每种突变型的稳态和添加MDP后的时间序列中没有观察到显着差异。当通过免疫沉淀回收与每种NOD2突变型结合的因子并通过SPS-PAGE确认时，与野生型相比，每种突变型没有观察到不同大小的条带。由上可知，根据NOD2突变型，NOD2的亚细胞定位、表达水平以及相互作用因子的种类没有大的变化，并且对免疫刺激的反应性存在差异。