侵襲性歯周炎の原因遺伝子NOD2変異型の機能解析

侵袭性牙周炎基因 NOD2 变体的功能分析

• 批准号: 22K09996
• 负责人: 永田 有希
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09996/
• 关键词: 侵襲性歯周炎; 免疫応答; NOD2; 口腔内細菌; 侵襲性歯周炎; 免疫応答; NOD2; 口腔内細菌

侵襲性歯周炎の原因遺伝子NOD2の5種類の変異型を293T細胞に導入し、細菌の構成因子であるlipopolysaccharide (LPS)、muramyl dipeptide (MDP)、慢性歯周炎の原因菌として知られるP. gingivalis (P.g.) および侵襲性歯周炎患者で高頻度に観察されるA. actinomycetemcomitans (A.a.) の細胞破砕液に対する免疫応答を確認した。その結果、MDPとP.g.菌、A.a.菌破砕液に対して何種類かのNOD2変異型で免疫応答の亢進が観察された。このような免疫亢進が、活性化したNOD2によるself-inductionの結果によるものであるかを確認するため、MDP添加後のNOD2発現量をwestern blotおよびRT-qPCRにて解析したところ、各変異型の定常時およびMDP添加後の時系列において、有意な発現量の差は確認されなかった。また、MDP添加後のNOD2の細胞内局在を免疫染色にて確認したところ、各変異型の定常時およびMDP添加後の時系列において、有意な違いは観察されなかった。各NOD2変異型と結合している因子を免疫沈降によって回収し、SPS-PAGEにて確認したところ、野生型と比較して、各変異型で異なるサイズのバンドは確認されなかった。以上のことから、NOD2変異型によって、NOD2の細胞内局在、発現量および相互作用する因子の種類には大きな変化は起きていないことと、免疫刺激に対する応答性には違いがみられることが確認された。

Five mutant forms of NOD2, the gene causative of invasive periodontitis, were introduced into 293T cells to confirm the immune responses to cell lysis of the bacterial constituents lipopolysaccharide (LPS), muramyl dipeptide (MDP), P. gingivalis (P.g.), known as the causative bacteria of chronic periodontitis, and A. actinomycetemcomitans （A.A.），在侵袭性牙周炎患者中经常观察到。结果，针对MDP的几种NOD2突变体形式增加了免疫反应。细菌和A.A.细菌干扰。为了确认这种免疫增强是否是由于激活NOD2的自我诱导的结果，通过Western blot和RT-QPCR分析了MDP后NOD2的表达水平，并且在MDP后添加了稳定的时间和时间序列中的表达水平没有显着差异。此外，当通过免疫染色确认MDP后NOD2的亚细胞定位时，在每种突变类型的固定时间或在MDP后的时间序列中未观察到显着差异。通过免疫沉淀收集与每个NOD2突变体结合的因子，并通过SPS-PAGE确认，与野生型相比，每种突变体类型的尺寸不同。从上面可以证实，NOD2突变体形式并未显着改变亚细胞定位，表达水平和相互作用因子的类型，并且对免疫刺激的反应有所不同。