視神経障害における軸索再生を妨げない軸索保護経路の解明

阐明视神经损伤时不阻碍轴突再生的轴突保护途径

基本信息

批准号：
22K09843
负责人：
北岡康史
金额：
$ 2.75万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09843/
关键词：
オートファジー緑内障軸索保護軸索再生 P70S6K Raptor ROCK阻害剤 Nicotinamide

项目摘要

視神経軸索保護に向かう経路にオートファジー活性化が存在するが、オートファジー活性化でよく知られているmTOR inhibitorは軸索再生を抑制することが報告されている。本研究ではオートファジーを活性化し、かつmTORに影響を与えない経路の探索を目的にしている。これまでにROCK inhibitorであるネタルスジルがオートファジーを活性化し、軸索保護作用を発揮することを報告したが、本研究ではさらにネタルスジルがmTORに影響を及ぼすか検討した。mTOR complexにはRaptorが含まれており、その下流にP70S6Kが存在する。そこで、TNF硝子体注射モデルを用いて、ネタルスジルのこれら因子に及ぼす影響を検討した。これら因子はリン酸化で活性化するのでそれぞれリン酸化P70S6Kとリン酸化Raptorの発現を視神経をサンプルにウェスタンブロットを行った。まずコントロール群に比してネタルスジル単独硝子体注射群ではリン酸化P70S6Kは変化を認めなかった。さらにTNF群と比較してTNF+ネタルスジル同時投与群ではリン酸化P70S6Kの有意な変化を認めなかった。次にraptorに関してはコントロール群に比してネタルスジル単独群でリン酸化raptorは変化を認めなかった。以上によりネタルスジルはオートファジー活性を活性化し軸索保護効果を示すが、mTOR関係には影響を与えず、つまり軸索再生には負の影響を認めない可能性を示した。さらにAMPK経路の関与も示唆され、AMPK活性剤でもオートファジーは活性化される。今後これらのmTORへの影響や、nicotinamideのAMPKへの影響などを検討していく。

自噬激活存在于视神经轴突保护的途径中，而众所周知的自噬激活的 mTOR 抑制剂据报道可以抑制轴突再生。本研究的目的是寻找一条激活自噬但不影响 mTOR 的途径。我们之前报道过ROCK抑制剂netarsudil激活自噬并发挥轴突保护作用，但在本研究中我们进一步研究netarsudil是否影响mTOR。 mTOR复合物包含Raptor，P70S6K存在于其下游。因此，我们使用 TNF 玻璃体内注射模型研究了奈达舒地尔对这些因素的影响。由于这些因子是通过磷酸化激活的，因此使用视神经样本进行蛋白质印迹来分别检查磷酸化 P70S6K 和磷酸化 Raptor 的表达。首先，与对照组相比，单独玻璃体内注射奈达舒地尔组中未观察到磷酸化 P70S6K 的变化。此外，与TNF组相比，在TNF+netarsudil联合给药组中没有观察到磷酸化P70S6K的显着变化。关于猛禽，与对照组相比，单独使用奈达舒地尔组中没有观察到磷酸化猛禽的变化。上述结果表明netarsudil激活自噬活性并表现出轴突保护作用，但不影响mTOR关系，表明其可能不会对轴突再生产生负面影响。此外，有人提出 AMPK 途径的参与，并且自噬也被 AMPK 激活剂激活。将来，我们将研究这些对 mTOR 的影响以及烟酰胺对 AMPK 的影响。