凝固と抗凝固の不均衡が及ぼすトロンビン生成とフィブリン構造、機能-病的血栓の解明

凝血与抗凝失衡引起的凝血酶生成、纤维蛋白结构和功能 - 阐明病理性血栓

• 批准号: 22K09055
• 负责人: 市川 順子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09055/
• 关键词: 新鮮凍結血漿; クリオプレシピテート; 凝固因子; 抗凝固因子; 血栓形成; トロンビン生成; 炎症; 新鮮凍結血漿; クリオプレシピテート; 凝固因子; 抗凝固因子; 血栓形成; トロンビン生成; 炎症

本研究の目的は、病的血栓形成の機序を解明することにあり、術後血栓のひとつの要因として、周術期に用いる血液製剤投与がある。日本において凝固因子補充目的で用いられる血液製剤は新鮮凍結血漿（FFP）とクリオプレシピテート（Cryo）がある。CryoはFFPよりも高濃度のフィブリノゲンを含み止血改善効果が高いが、その作成に大型の冷却遠心機が必要になる。そこで、人工心肺中にFFPを投与し限外濾過により濃縮した場合を想定し、in vitroで透析膜を用いてFFPを限外濾過（UF）後に生成した濃縮物を凝固因子活性などにつきCryo製剤と比較検討した。37℃で融解したFFPを500mlの生理食塩水で洗浄後の透析膜内に流入させ、ポンプによって流量300ml/minで送液を行い、検体量を含めて廃液360mlを排出させ濃縮させた。FFPとUF後の濃縮物及びCryoの各種蛋白、各凝固因子、抗凝固因子、血液凝固機能などを測定し、各因子を比較検討した。UF濃縮液はCryoと比較して、フィブリノゲン濃度、FⅧ活性、vWF活性、浸透圧は有意に低いものの、FⅤ、ＦⅨ活性、アンチトロンビン濃度、総蛋白、アルブミン、比重が有意に高かった。ROTEMではCryoの最大血餅硬度がUF濃縮液と比較して有意に高く、フィブリノゲン濃度上昇を反映していると考えた。本研究における透析膜の分画分子量10kDa程度であり、理論上、分子量10~50KDa程度以上の成分を濃縮回収できる。しかし、UFにおけるフィブリノゲンの回収率は34.8％と低く、これは全濾過による目詰まりや濃度分極が進行した結果、膜の分離性能の低下が原因と考えた。一方、蛋白やアルブミン濃度は高く膠質浸透圧維持に有効であり、アンチトロンビン活性も高いゆえ抗血栓性にも優れていると考えた。

这项研究的目的是阐明病理血栓形成的机制，术后血栓形成的一个因素是围手术期使用的血液产品。日本用于凝结因子替代目的的血液产品包括新鲜的冷冻血浆（FFP）和冷冻沉淀（冷冻）。低温含有比FFP更高的纤维蛋白原浓度，并且在改善止血方面非常有效，但是它需要大量的冷藏离心机才能创建它。因此，我们假设FFP是在人造心脏肺机中施用的，并通过超滤浓缩，并且使用透析膜在体外进行超滤后产生的浓缩物与其凝结因子活性等的冷冻制剂进行比较。将FFP在37°C融化的FFP用500 mL盐水洗涤，并将其流入透析膜中，并以300 mL/min的流速为300 ml/min的泵喂食，并将360 mL的废液（包括样品体积）浸入并浓缩。测量了FFP和UF后的浓缩物，冷冻因子的各种蛋白质，抗凝因子，血液凝结功能等，并进行了比较并检查了每个因子。与冷冻浓缩物相比，UF浓缩物的纤维蛋白原浓度，Fⅷ活性，VWF活性和渗透压显着降低，但Fⅴ，Fⅸ活性，抗凝血酶浓度，总蛋白质，白蛋白和比重明显更高。在Rotem中，冷冻的最大凝块硬度显着高于UF浓缩物的最大硬度，这反映了纤维蛋白原浓度的增加。在这项研究中，透析膜的分子量约为10 kDa，从理论上讲，分子量约为10至50 kDa或更多的成分可以浓缩和回收。然而，UF中纤维蛋白原的恢复率在34.8％时较低，这被认为是由于膜分离性能的恶化，这是由于总过滤引起的堵塞和浓度极化的结果。另一方面，蛋白质和白蛋白浓度在维持结肠渗透压方面高且有效，并且由于它也是高度抗凝血酶活性，因此被认为具有出色的抗抗血栓性特性。