膵癌における低酸素応答性エレメントのターゲット遺伝子群の同定

胰腺癌缺氧反应元件靶基因的鉴定

基本信息

批准号：
22K08797
负责人：
猪川祥邦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08797/
关键词：
膵癌 HIF1α 低酸素応答性エレメント微小環境転写因子

项目摘要

膵癌は乏血性な腫瘍であり、低酸素な微小環境が特徴的である。本研究では低酸素誘導因子の一つであるHIF1αが膵癌においてどのように低酸素抵抗性に関わるのか、そのメカニズムを解明することを目的とする。まず名古屋大学医学部附属病院・消化器外科学教室で保有する膵癌細胞株であるKP1NLおよびTU8902、また多血性の特徴を持つ肝細胞癌の細胞株であるHepG2およびHIF1αを用いてsiRNAによるHIF1αのノックダウン実験を行った。それぞれ、siCtrlに比較して1～3%までmRNAの発現を低下させることに成功した。これらHIF1αをノックダウンした細胞株およびコントロールから抽出したmRNAを用い、PCR array解析を行い、Human Hypoxia Signaling Pathwayについての分子の発現を比較した。PCR array内にもHIF1αが含まれており、４つの細胞株において再現性を持ってsiRNAによりHIF1α発現が低下していた。血管新生に関わる分子であるVEGFAの発現は膵癌細胞株でのHIF1αノックダウンで1.00, 0.76と比較的低下していないのに対し、肝細胞癌細胞株では0.67, 0.75と低下している傾向を認めた。これは低酸素な腫瘍環境下において膵癌は乏血性であるのに対し、多血性の肝細胞癌がよりVEGFによる血管新生促進を誘導していることに合致するデータと考えられた。VEGFAのように肝細胞癌でより低下している傾向を認める分子としてPGF、SLC2A1、ALDOC、BHLHE40、などが認められ、逆に膵癌でより低下している傾向のある分子としてはADORA2B、ANXA2、ARNT、EGLN2などが同定された。これらの低酸素応答性パスウェイの分子とHIF1αの相関が臨床検体でも認められるか、膵癌症例において評価するために標本から順次RNA抽出、cDNA作成を進めている。

胰腺癌是一种缺血性肿瘤，其特点是微环境缺氧。本研究的目的是阐明缺氧诱导因子之一的HIF1α参与胰腺癌耐缺氧的机制。首先，我们使用名古屋大学医院胃肠外科拥有的胰腺癌细胞系KP1NL和TU8902以及具有富血管特征的肝细胞癌细胞系HepG2和HIF1α，使用siRNA进行敲低HIF1α实验。。与 siCtrl 相比，每种方法都成功地将 mRNA 表达降低了 1% 至 3%。使用从这些 HIF1α 敲低细胞系和对照中提取的 mRNA 进行 PCR 阵列分析，并比较与人类缺氧信号通路相关的分子的表达。 HIF1α 也包含在 PCR 阵列中，并且 siRNA 在四种细胞系中可重复地降低 HIF1α 表达。在胰腺癌细胞系中敲除 HIF1α 后，参与血管生成的分子 VEGFA 的表达相对不变，为 1.00 和 0.76，而在肝细胞癌细胞系中，VEGFA 的表达趋于下降，为 0.67 和 0.75。该数据被认为与胰腺癌在缺氧肿瘤环境下呈现缺血性的事实相一致，而富血管性肝细胞癌则诱导VEGF促进血管生成。与VEGFA一样，在肝细胞癌中倾向于减少更多的分子包括PGF、SLC2A1、ALDOC和BHLHE40，而在胰腺癌中倾向于减少更多的分子包括ADORA2B、ANXA2、ARNT、EGLN2等。为了评估这些缺氧反应通路分子与 HIF1α 之间的相关性是否也在胰腺癌病例的临床标本中观察到，我们正在进行从标本中连续提取 RNA 和创建 cDNA。