カプシド蛋白質の二量体化を標的とした新規抗HIV薬開発に向けた基礎研究

开发针对衣壳蛋白二聚化的新型抗HIV药物的基础研究

• 批准号: 22K08615
• 负责人: 村上 努
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08615/
• 关键词: HIV; カプシド蛋白質; 二量体化; 抗HIV剤

我々はこれまで、in silicoスクリーニングによって、HIV-1カプシド（CA）の二量体化に関与するHelix9-Helix9相互作用を標的とする低分子化合物の中の一つ、MKN-3誘導体（TKB063）ついて報告した。今年度は、TKB063を用いた抗HIV-1作用機序の解析を行い、さらにTKB063より活性が高く、細胞毒性が低い誘導体の創製を目指した。293T細胞において、TKB063存在・非存在下でNL4-3をトランスフェクトし、ウイルス産生量（p24 ELISA）および産生ウイルスの感染価（TZM-bl細胞）を測定した。25 uM TKB063処理においてウイルス産生量および感染価の部分的な低下が認められた。次に、MT-4細胞に高濃度のHIV-1を吸着させた後、TKB063存在・非存在下で温度を37℃に上げ感染を進行させ、感染後30時間に産生されたウイルス量および産生ウイルスの感染価を測定した。産生ウイルス量は25 uMのTKB063で処理した細胞においても大きな減少は認められなかった。一方、産生ウイルスの感染価は、処理したTKB063の濃度に依存して低下していた。以上の結果は、新規抗HIV-1低分子化合物TKB063は、HIV-1複製後期過程においてCAに作用して、産生ウイルスの感染性を低下させている可能性を示している。また、TKB063の誘導体合成では、疎水性および細胞膜透過性の改変により、TKB063より高い抗HIV-1活性を示す化合物の創製に成功した。

通过计算机筛选，我们之前已经鉴定出 MKN-3 衍生物 (TKB063)，这是一种针对我报道过的 HIV-1 衣壳 (CA) 二聚化中涉及的 Helix9-Helix9 相互作用的低分子量化合物。今年，我们利用TKB063分析了抗HIV-1的作用机制，旨在创造一种比TKB063活性更高、细胞毒性更低的衍生物。在存在或不存在TKB063的情况下用NL4-3转染293T细胞，并测量产生的病毒量(p24 ELISA)和产生的病毒(TZM-bl细胞)的感染滴度。用 25 uM TKB063 处理后，观察到产生的病毒量和感染滴度部分下降。接下来，将高浓度的HIV-1吸附至MT-4细胞后，在存在或不存在TKB063的情况下将温度升高至37℃以允许感染进行，并测量病毒的感染滴度。在用 25 uM TKB063 处理的细胞中没有观察到产生的病毒量显着减少。另一方面，所产生的病毒的感染滴度根据所处理的TKB063的浓度而降低。上述结果表明，新型抗HIV-1低分子化合物TKB063可能作用于HIV-1复制后期的CA，降低所产生病毒的感染性。此外，在TKB063衍生物的合成中，我们通过改变其疏水性和细胞膜通透性，成功地创造了一种比TKB063表现出更高抗HIV-1活性的化合物。

项目成果

Gag蛋白質前駆体（Pr55Gag）の折畳み制御機構の予測と検証

Gag蛋白前体（Pr55Gag）折叠控制机制的预测与验证

• 发表时间: 2022
• 作者: 村上 努;横山 勝;佐藤裕徳;野間口雅子;小谷 治
• 通讯作者: 小谷 治