小脳神経ネットワーク構造解析から探るApc遺伝子変異と統合失調症症状の関係解明

通过小脑神经网络结构分析阐明Apc基因突变与精神分裂症症状的关系

基本信息

批准号：
22K07626
负责人：
尾之内高慶
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

大腸癌抑制遺伝子として発見されたApc遺伝子は、大腸や脳(海馬,小脳)に多く発現している。Apc遺伝子変異と脳腫瘍発生との関連は証明されておらず、脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。これまでに研究代表者らは、脳に発現するApc遺伝子の癌抑制以外の機能を解明するために、癌が発生しない変異APC(APC1638T)を発現するAPC1638Tマウスを作製して、APC1638Tマウスは海馬神経細胞のシナプス形成と伝達に異常があり、統合失調症様行動を示すことを報告した。小脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。本研究では、APC1638Tマウス小脳における「三次元神経ネットワーク構造」と「APCとPSD-95（APC結合タンパク質）の局在」を調べて、APCとPSD-95の相互作用が小脳の三次元神経ネットワーク形成に与える影響を明らかにする。2022年度は、①研究協力者からのマウス提供予定の打合せ、②免疫染色で用いる抗体（抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体）の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。2022年度から2023年度までの間に、本研究で用いる生後8週齢のオスの野生型APCマウス（5匹）とAPC1638Tマウス（5匹）の小脳組織を、研究協力者の研究施設から提供いただけることになった。4%パラホルムアルデヒドで固定した野生型APCマウス小脳のパラフィン切片を用いて、抗APC抗体,抗MAP2抗体,抗体PSD-95抗体の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。抗原賦活条件として、Proteinase Kによる酵素処理、pH6のクエン酸バッファーによる加熱処理、pH8のEDTAによる加熱処理を検討した。抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体は、pH8のEDTAによる加熱処理が抗原を賦活させることが分かった。

被发现为结肠癌抑制基因的APC基因在大肠和大脑（海马，小脑）中高度表达。 APC基因突变与脑肿瘤发育之间的关联尚未得到证明，并且在大脑中表达的APC基因的功能尚不清楚。迄今为止，研究人员创建了表达无癌突变体APC（APC1638T）的APC1638T小鼠，以澄清除癌症抑制以外的大脑中表达的APC基因的功能，并报道APC1638T小鼠表现出异常的突触形成和传播schizizia schizizia-schizizia-schizizia均表现出异常。在小脑中表达的APC基因的功能尚不清楚。在这项研究中，我们研究了APC1638T小鼠小脑中的“三维神经网络结构”和“ APC和PSD-95（APC结合蛋白）的定位”，我们阐明APC和PSD-95之间相互作用对三维Neurnet网络在Cerebellum中的形成的影响。在2022财年中，1）进行了一项咨询，以提供研究伙伴的小鼠，2）对用于免疫染色（抗APC抗体，抗PSD-95抗体，抗MAP2抗体）的抗体的染色条件（抗原激活条件）进行了一项研究。在2022年至2023年之间，与研究伙伴合作的研究设施将能够提供8周大的男性野生型APC小鼠（5）和APC1638T小鼠（5）的小脑组织（5）。用4％多聚甲醛固定的野生型APC小鼠小脑的石蜡切片用于研究抗APC抗体，抗MAP2抗体和抗体PSD-95抗体的染色条件（抗原激活条件）。抗原激活的条件是研究用蛋白酶K，用柠檬酸盐缓冲液进行热处理的酶处理以及用EDTA用pH 8进行热处理。发现使用pH 8 EDTA的热处理可激活抗APC抗体，抗PSD-95抗体和抗MAP2抗体中的抗原。