小脳神経ネットワーク構造解析から探るApc遺伝子変異と統合失調症症状の関係解明

通过小脑神经网络结构分析阐明Apc基因突变与精神分裂症症状的关系

基本信息

批准号：
22K07626
负责人：
尾之内高慶
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

大腸癌抑制遺伝子として発見されたApc遺伝子は、大腸や脳(海馬,小脳)に多く発現している。Apc遺伝子変異と脳腫瘍発生との関連は証明されておらず、脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。これまでに研究代表者らは、脳に発現するApc遺伝子の癌抑制以外の機能を解明するために、癌が発生しない変異APC(APC1638T)を発現するAPC1638Tマウスを作製して、APC1638Tマウスは海馬神経細胞のシナプス形成と伝達に異常があり、統合失調症様行動を示すことを報告した。小脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。本研究では、APC1638Tマウス小脳における「三次元神経ネットワーク構造」と「APCとPSD-95（APC結合タンパク質）の局在」を調べて、APCとPSD-95の相互作用が小脳の三次元神経ネットワーク形成に与える影響を明らかにする。2022年度は、①研究協力者からのマウス提供予定の打合せ、②免疫染色で用いる抗体（抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体）の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。2022年度から2023年度までの間に、本研究で用いる生後8週齢のオスの野生型APCマウス（5匹）とAPC1638Tマウス（5匹）の小脳組織を、研究協力者の研究施設から提供いただけることになった。4%パラホルムアルデヒドで固定した野生型APCマウス小脳のパラフィン切片を用いて、抗APC抗体,抗MAP2抗体,抗体PSD-95抗体の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。抗原賦活条件として、Proteinase Kによる酵素処理、pH6のクエン酸バッファーによる加熱処理、pH8のEDTAによる加熱処理を検討した。抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体は、pH8のEDTAによる加熱処理が抗原を賦活させることが分かった。

被发现为结直肠癌抑制基因的APC基因通常在大肠和大脑（海马，小脑）中表达。 APC基因突变与脑肿瘤的发生之间的关联尚未证实，并且在大脑中表达的APC基因的功能尚不清楚。迄今为止，研究代表产生了表达不引起癌症的APC APC（APC1638T）的APC1638T小鼠，以阐明在大脑中表达的APC基因以外的其他功能，并且APC1638T小鼠是HIMA报道说神经细胞的突触形成和传播具有异常，并表现出精神分裂症的行为。在小脑中表达的APC基因的功能尚不清楚。在这项研究中，检查了APC1638T小脑和“ APC和PSD-95（APC键蛋白）的局部区域”中的“三维神经网络结构”，APC和PSD-95之间的相互作用是小脑的三维神经网络。在2022财年，我们检查了计划合作者计划提供的染色条件（抗原激活条件）（抗原激活条件），以及（2）抗体（抗APC抗体，抗PSD-95抗体，抗体-MAP2抗体）用于免疫染色。在2022年至2023年之间，可以通过研究合作者的研究设施提供了雄性野生型APC小鼠（5只动物）和APC1638T小鼠（5只动物）的脑组织。 4％使用固定的野生型APC小鼠小脑固定的野生型APC小脑固定，抗APC抗体的染色条件（抗激活条件），抗MAP2抗体，抗MAP2抗体，抗体PSD-95抗体。作为抗原激活条件，检查了蛋白酶K的酶处理，使用PH6柠檬酸含量缓冲液的加热处理以及使用PH8 EDTA的加热处理。抗APC抗体，抗PSD-95抗体和抗MAP2抗体表明，使用PH8热处理可激活抗原。