細胞骨格動態制御によるALS病態改善の試み

尝试通过控制细胞骨架动力学来改善 ALS 病理学

基本信息

批准号：
22K07539
负责人：
清水幹人
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度はRepulsive guidance molecule A(RGMa)抗体を投与したALSモデルマウスにおける、細胞骨格動態の検証を行った。ファロイジンとDNaseⅠによる免疫染色によりアクチン重合の程度の可視化を行ったところ、ALSモデルマウスにおいてアクチンの脱重合が誘導され、RGMa抗体投与によりそれが改善することが示された。またwestern boltをおこなうことで、RGMaシグナルの活性化の程度を定量化した。RGMaは細胞膜上のNeogeninと結合することで、Rhoを中心としたsmall GTPaseの経路を活性化することが知られている。今回、その下流であるSMADやProfilin、Cofilinの活性化を確認した所、ALSモデルマウスにおいてアクチン重合を阻害するCofilinが活性化しており、RGMa抗体投与によりそれが改善することが確認された。一方でもともと予想されていた、ALSモデルマウスにおけるtubulinの脱重合に関しては、CRMP2などの上流のシグナルをwestern blotで定量化したが、メカニズムを推定できるような明瞭な結果を得ることができなかった。またすでに2023年度に予定していた神経細胞のcell lineやラットの神経細胞primary cellを用いて、in vitroにおける、RGMaと細胞骨格動態の実験系を確立しつつある。目下、RGMaの刺激が入りやすい細胞腫のスクリーニングを行っており、SHSYやNeuro2Aといった神経細胞のcell lineを使用し、RGMaで刺激を行い下流のシグナルを検討しているが、通常の条件では十分な刺激が入らないことが確認された。現在ラット神経細胞のprimary cellの樹立を行い、検討中である。

在 2022 财年，我们验证了使用排斥引导分子 A (RGMa) 抗体治疗的 ALS 模型小鼠的细胞骨架动力学。通过使用鬼笔环肽和 DNase I 进行免疫染色来观察肌动蛋白聚合程度，结果表明在 ALS 模型小鼠中诱导了肌动蛋白解聚，并且通过施用 RGMa 抗体可以改善这种情况。我们还通过执行 Western Bolt 量化了 RGMa 信号激活的程度。已知 RGMa 通过与细胞膜上的 Neogenin 结合来激活以 Rho 为中心的小 GTP 酶途径。这次，我们确认了其下游的SMAD、Profilin和Cofilin的激活，发现抑制肌动蛋白聚合的Cofilin在ALS模型小鼠中被激活，通过施用RGMa抗体可以改善这一情况。另一方面，对于最初预测的ALS模型小鼠中的微管蛋白解聚，我们使用蛋白质印迹法对CRMP2等上游信号进行了定量，但无法获得可以推断其机制的明确结果。此外，我们已经在使用神经元细胞系和大鼠神经元原代细胞建立 RGMa 和细胞骨架动力学的体外实验系统，计划于 2023 年进行。目前，我们正在筛选对RGMa刺激敏感的细胞肿瘤，使用SHSY和Neuro2A等神经元细胞系，并用RGMa刺激它们以检查下游信号，但正常条件下不足以证实没有刺激。。我们目前正在建立大鼠原代神经元细胞并正在对此进行研究。

项目成果

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Identification of double-stranded DNA in the cerebrospinal fluid of patients with acute neuromyelitis optica spectrum disorder

DOI：
10.1016/j.jocn.2022.12.005
发表时间：
2023-01
期刊：
Journal of Clinical Neuroscience
影响因子：
2
作者：
Mamoru Yamamoto;T. Okuno;Jin-Lan Piao;Mikito Shimizu;K. Miyamoto;T. Nukui;M. Kinoshita;T. Koda;R. D. Haryuni;H. Mochizuki;T. Sugimoto;Y. Nakatsuji
通讯作者：
Mamoru Yamamoto;T. Okuno;Jin-Lan Piao;Mikito Shimizu;K. Miyamoto;T. Nukui;M. Kinoshita;T. Koda;R. D. Haryuni;H. Mochizuki;T. Sugimoto;Y. Nakatsuji