Investigation of apolipoproteins transfer quantitative method and their mechanism

载脂蛋白转移定量方法及其机制研究

• 批准号: 22K07466
• 负责人: 大川 龍之介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07466/
• 关键词: アポリポタンパク転送; 中性脂肪代謝; リポタンパクリパーゼ; 高比重リポタンパク; 超低比重リポタンパク; リポタンパク; アポリポタンパク; 転送; 脂質代謝

１．リポタンパク間のアポリポタンパク転送の定量法の確立高比重リポタンパク（HDL）とビオチン標識した超低比重リポタンパク（VLDL）とを生体内の平均的なタンパク濃度比で混合し，インキュベーションを行い，その後，超遠心によって再びHDLを分離した．分離したHDL中に転送されたアポリポタンパクをウエスタンブロッティング（ストレプトアビジンで視覚化）および液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS/MS）で分析したところ，われわれが既に明らかにしたアポリポタンパクC-II，C-III，Eに加えて，まだ不確定であったアポリポタンパクC-IVがVLDL濃度依存的にHDLに転送されていることを確認した．転送量を定量するために，ELISA法を用いた転送量の評価法を構築すべく，まず初めにアポリポタンパクC-IIを対象に試みた．その結果，HDLタンパク濃度あたりで1.0×10^-5　mg/mL程度まで高感度に定量することが可能となった．２．VLDL中の中性脂肪の被水解率の評価アポリポタンパク転送後の各種脂質代謝に与える影響を確認するため，はじめにVLDL中の中性脂肪の被水解率評価法の確立を目指した．血漿を対象とした場合とVLDLを対象とした場合では，リポタンパクリパーゼに対するVLDL中の中性脂肪の水解の速度は異なり，その要因として，血漿中に存在する他のリポタンパクがリポタンパクリパーゼのVLDLへのアクセスを抑制していることが示唆された．この現象を確認するために，各種リポタンパク分画，アルブミンやグロブリンを主に含むリポタンパク以外の血漿タンパク成分を含む分画を用いて検証した．その結果，HDLが最もVLDL中の中性脂肪に対するリポタンパクリパーゼの作用に対する抑制効果が強いことが明らかになった．

1。估计的高特异性自由林（HDL）和超低 - 特异性脂肪瘤（VLDL）被标记为生物素，并由生物素的平均蛋白质浓度混合并孵育。通过Western印迹（用链球菌的ABIDIN可视化）和液相色谱质谱法（LC-MS/MS）分析了被转移到分离的HDL的Apolipotampa分析，我们已经揭示了Apolipotan C-II，除了C -III和E，已证实，通过VLDL浓度将无法确定的无能力C-IV转移至HDL。为了使用ELISA方法来构建转移量的评估方法来量化传输量，我们首先尝试申请Apolipotent C-II。结果，可以每HDL蛋白浓度量化高达1.0×10^-5 mg/ml的高灵敏度。 2。为了确认对VLDL中性脂肪的水分分辨率转移后对各种脂质代谢的影响，我们首先旨在在VLDL中建立中性脂肪。当涉及血浆和VLDL时，VLDL中的中性脂肪速度在Lipotamp夹酶中有所不同，作为一个因素，血浆中的其他脂肪剂在等离子体中。为了确认这一现象，我们使用脂肪素（主要是白蛋白和球蛋白）以外的各种脂蛋白分裂和含有等离子体蛋白成分的分层进行了验证。结果，很明显，HDL对Lipotamp Cruacripase对VLDL中中性脂肪的作用具有很强的作用。

项目成果

1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)を用いた各種血液検体の抗酸化能測定の臨床応用に向けた試み

使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）测定各种血液样本抗氧化能力的临床应用尝试

• 发表时间: 2022
• 作者: Yamada T.;Kameda T.;and Ohkawa R.;大熊 彩花，荻野 芽生，亀田 貴寛，大川 龍之介
• 通讯作者: 大熊 彩花，荻野 芽生，亀田 貴寛，大川 龍之介

The effect of sampling procedure and substrate type for activity assay on PON1 assessment

采样程序和活性测定底物类型对 PON1 评估的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Kawaguchi R.;Kameda T.;Yoshimoto A.;and Ohkawa R.
• 通讯作者: and Ohkawa R.

The effect of high-density lipoprotein N-homocysteinylation on paraoxnase1 activities and distribution

高密度脂蛋白N-同型半胱氨酸化对对氧酶1活性和分布的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Kawaguchi R.;Kameda T.;Yoshimoto A.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R

Improvement of serum antioxidant capacity assay using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl

使用 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼改进血清抗氧化能力测定

• 发表时间: 2022
• 作者: Ogino M.;Kameda T.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R

Development of internal standard for lipoprotein subclass analysis using dual detection gel-permeation HPLC system

使用双重检测凝胶渗透 HPLC 系统开发脂蛋白亚类分析的内标

• 发表时间: 2022
• 作者: Ogino M.;Kameda;Mutsuda Y.;Tanaka H.;Takahashi J.;Okazaki M.;Ai M.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R