難治がんに有望ながん免疫effector T細胞特性の基盤的解明と細胞治療開発

从根本上阐明癌症免疫效应 T 细胞的特性，有望用于治疗顽固性癌症和细胞疗法的开发

基本信息

批准号：
22K07251
负责人：
西田純幸
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07251/
关键词：
WT1 CTL high-avidity TCR がん免疫療法細胞傷害性T細胞膵臓がんがんワクチン

项目摘要

進行膵臓癌患者を対象に実施したゲムシタビン（GEM）併用WT1ペプチドワクチン療法の臨床試験で採取した血液臨床検体の末梢血単核細胞（PBMCs）から、high-avidity T細胞受容体（TCR）を単離することを目的として実験を遂行した。最初に、HLA-A*02:01陽性進行膵癌患者17例（治療別－GEM + WT1ワクチン：8例／GEM単独：9例）のPBMCsから HLA-A*02:01拘束性WT1ペプチド WT1-126ペプチド（WT1-126）に特異的なTCRを有する細胞傷害性T細胞（CTL）を単離した。low-avidity TCRを持つ細胞を増殖させないために、PBMCsを低濃度（10 ng/μL)のWT1-126で刺激しながら1週間培養しCTLを増幅してWT1-126 tetramer陽性細胞(WT1-126-CTLs)をsingle cell sortingした。結果、全体として46個のWT1-126-CTLsクローンの増殖を認めた。WT1ペプチドワクチンを受けた患者由来のPBMCs(8例中7例で誘導可能だった)から主としてこれらのWT1-126-CTLsを得た。次に、樹立したWT1-126-CTLs の46クローンそれぞれの機能評価を目的にWT1-126ペプチド反応性をサイトカイン（IFN-gamma）産生能で評価した。高濃度WT1-126（1000 ng/μL）刺激では全クローンでIFN-gamma産生を認めたが、その中に低濃度WT1-126（10 ng/μL）刺激下においても高いサイトカイン産生能を発揮する5クローンを同定した。更にこれら5クローンのTCRα鎖およびβ鎖のCDR3配列を解析したところ、2クローンは同じCDR3を有しており、同一クローンであることが分かった。現在は得られた4クローン由来TCRを2D3細胞（TCRシグナルの活性化を、GFP発現を指標として評価できるNFAT-GFPレポーター細胞）に導入し、導入TCRの細胞表面発現ならびに、WT1ペプチド濃度依存的GFP発現を評価している。今後、TCRをヒトT細胞に発現させ、細胞傷害活性およびサイトカイン産生能などを評価することで、臨床に使用できるようなWT1特異的TCRであることを示す。

高亲和力 T 细胞受体 (TCR) 是从外周血单核细胞 (PBMC) 中分离出来的，这些细胞是在晚期胰腺癌患者中进行的 WT1 肽疫苗治疗联合吉西他滨 (GEM) 临床试验中收集的临床血液样本中收集的。进行的目的是分离首先，从 17 名 HLA-A*02:01 阳性晚期胰腺癌患者的 PBMC 中收集 HLA-A*02:01 限制性 WT1 肽 WT1（按治疗 - GEM + WT1 疫苗：8 例/单独使用 GEM： 9 例）分离出具有 126 肽（WT1-126）特异性 TCR 的细胞毒性 T 细胞（CTL）。为了防止低亲和力TCR细胞的增殖，将PBMC培养1周，同时用低浓度（10 ng/μL）的WT1-126刺激，以扩增CTL和WT1-126四聚体阳性细胞（WT1 -126 -CTL）进行单细胞分选。结果，观察到总共46个WT1-126-CTL克隆增殖。这些 WT1-126-CTL 主要从接受 WT1 肽疫苗（8 例中有 7 例可诱导）的患者的 PBMC 中获得。接下来，为了对46个建立的WT1-126-CTL克隆中的每一个进行功能评估，通过细胞因子(IFN-γ)产生能力评估WT1-126肽反应性。当用高浓度 WT1-126 (1000 ng/μL) 刺激时，所有克隆都产生 IFN-γ，但其中一些克隆在用低浓度 WT1-126 (10 ng/μL) 刺激时也表现出高细胞因子产生能力。鉴定出 5 个克隆。。此外，当分析这5个克隆的TCRα链和β链的CDR3序列时，发现2个克隆具有相同的CDR3并且是相同的克隆。目前，我们已将获得的四个克隆衍生的TCR导入2D3细胞（NFAT-GFP报告细胞，可以使用GFP表达作为指标来评估TCR信号的激活），并研究导入的TCR的细胞表面表达和正在评估 WT1 肽浓度依赖性 GFP 表达。未来，我们将在人T细胞中表达该TCR，并评估其细胞毒活性和细胞因子产生能力，从而证明它是可用于临床的WT1特异性TCR。