脳腫瘍幹細胞の表現型可塑性及びフェノタイプ・スイッチの実態解明と克服方法の確立

阐明脑肿瘤干细胞表型可塑性和表型转换的现实并建立克服它们的方法

基本信息

批准号：
22K07177
负责人：
サンペトラオルテア
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

細胞の表現型の可塑性は細胞がゲノムの変化なく表現型のみを変化させる能力として理解されている。可塑性は個体発生において重要な役割を果たすことが知られているが、近年、癌細胞、特に癌幹細胞が環境の変化に適応する過程においても注目されている。しかし、腫瘍組織における表現型可塑性の実態が充分に解明されておらず、有効な阻害方法も確立されていない。申請者はこれまでの研究で、脳腫瘍幹細胞が代謝可塑性を発揮することで酸素や糖の不足に可逆的な適応反応を示し、そして、その際の表現型の変化が薬剤抵抗性を引き起こすことを見出した。本研究では脳腫瘍幹細胞の表現型可塑性を誘導する微小環境因子を広く探索し、明らかにすることを目指し、2022年度はまず3つの評価系を確立した。１．培養脳切片を用いたex vivo評価系の確立：正常脳並びに腫瘍を移植した脳より脳切片を作製、培養した。Iba1, CX3CR1等に対する抗体を用いたイメージングにより腫瘍細胞と脳内常在型免疫細胞の相互作用を可視化した。また、培養条件を変えることによって微小環境を変化させた上で切片より線条体、脳表などの部位ごとに組織を摘出し、フラクス・アナライザーで代謝を測定するアッセイ系を確立した。２．免疫細胞の評価系の確立：脳切片ではマイクログリア、星状細胞など、脳内に存在する免疫応答関連細胞の解析が可能であるが、血流が途絶えているため、T細胞やB細胞などの全身免疫応答関連細胞の解析は困難である。末梢免疫系の影響を検証するため、正常脳並びに腫瘍を移植した脳の免疫細胞のみを単離し、10-15種類の細胞をフローサイトメトリーによって同時に解析することで微小環境の詳細な評価を行うことに成功した。3．免疫応答が異なる腫瘍より3種類の脳腫瘍幹細胞を新しく樹立し、その遺伝子発現プロフィルの解析を始めた。

细胞的表达类型被理解为细胞仅改变表达类型而无需改变基因组的能力。众所周知，可塑性在个体暴发中起着重要作用，但是近年来，在适应环境变化的过程中，尤其是癌细胞的变化引起了人们的关注。但是，尚未完全阐明肿瘤组织中表达 - 型可塑性的实际状态，也没有建立有效的抑制方法。申请人表明，脑肿瘤干细胞对氧气和糖缺乏症的反应反应，并且表达类型变化会导致耐药性。在这项研究中，我们首先在2022财年建立了三个评估系统，旨在广泛探索和阐明微观因素，以诱导脑肿瘤干细胞的表达类型可塑性。 1。使用培养大脑切割来建立离体评估系统：从大脑和肿瘤移植的大脑和大脑中创建和培养大脑碎片。想象一下，通过使用IBA1，CX3CR1和等等的抗体进行成像，肿瘤细胞和普通免疫细胞在大脑中的相互作用。此外，通过改变培养条件的改变，已经改变了一个小环境，并建立了一种测定系统来用Fraxus分析仪测量新陈代谢，该分析仪会去除每个部分的组织，例如线和脑桌，而不是切割。 2。建立免疫细胞评估系统：在大脑碎片中，可以分析大脑中存在的免疫反应细胞，例如小胶质细胞和类似星形的细胞，但由于血流被中断，T细胞和B细胞难以分析与整个身体免疫反应有关的细胞。为了验证外周免疫系统的影响，仅分离出肿瘤的正常大脑和免疫细胞，并通过浮动的群落同时分析10-15个细胞，以提供微观环境的详细评估成功。 3。已经建立了三种脑肿瘤干细胞，而不是具有不同免疫反应的肿瘤，并且对其基因表达谱的分析已经开始。