脳腫瘍幹細胞の表現型可塑性及びフェノタイプ・スイッチの実態解明と克服方法の確立

阐明脑肿瘤干细胞表型可塑性和表型转换的现实并建立克服它们的方法

基本信息

批准号：
22K07177
负责人：
サンペトラオルテア
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

細胞の表現型の可塑性は細胞がゲノムの変化なく表現型のみを変化させる能力として理解されている。可塑性は個体発生において重要な役割を果たすことが知られているが、近年、癌細胞、特に癌幹細胞が環境の変化に適応する過程においても注目されている。しかし、腫瘍組織における表現型可塑性の実態が充分に解明されておらず、有効な阻害方法も確立されていない。申請者はこれまでの研究で、脳腫瘍幹細胞が代謝可塑性を発揮することで酸素や糖の不足に可逆的な適応反応を示し、そして、その際の表現型の変化が薬剤抵抗性を引き起こすことを見出した。本研究では脳腫瘍幹細胞の表現型可塑性を誘導する微小環境因子を広く探索し、明らかにすることを目指し、2022年度はまず3つの評価系を確立した。１．培養脳切片を用いたex vivo評価系の確立：正常脳並びに腫瘍を移植した脳より脳切片を作製、培養した。Iba1, CX3CR1等に対する抗体を用いたイメージングにより腫瘍細胞と脳内常在型免疫細胞の相互作用を可視化した。また、培養条件を変えることによって微小環境を変化させた上で切片より線条体、脳表などの部位ごとに組織を摘出し、フラクス・アナライザーで代謝を測定するアッセイ系を確立した。２．免疫細胞の評価系の確立：脳切片ではマイクログリア、星状細胞など、脳内に存在する免疫応答関連細胞の解析が可能であるが、血流が途絶えているため、T細胞やB細胞などの全身免疫応答関連細胞の解析は困難である。末梢免疫系の影響を検証するため、正常脳並びに腫瘍を移植した脳の免疫細胞のみを単離し、10-15種類の細胞をフローサイトメトリーによって同時に解析することで微小環境の詳細な評価を行うことに成功した。3．免疫応答が異なる腫瘍より3種類の脳腫瘍幹細胞を新しく樹立し、その遺伝子発現プロフィルの解析を始めた。

细胞表型可塑性被理解为细胞仅在没有基因组变化的情况下改变其表型的能力。众所周知，可塑性在致癌性致癌性中起着重要作用，但是近年来，在适应环境变化的过程中，癌细胞（尤其是癌症干细胞）也引起了人们的注意。但是，尚未完全了解肿瘤组织中表型可塑性的实际状态，并且尚未确定有效的抑制方法。在先前的研究中，申请人发现脑肿瘤干细胞具有代谢可塑性并表现出对氧和糖缺乏的可逆反应，并且此时表型变化导致耐药性。在这项研究中，我们旨在广泛探索和澄清诱导脑肿瘤干细胞表型可塑性的微环境因素，并在2022年首先建立了三个评估系统。1。使用培养的脑部培养的脑部分段建立了一个过体的评估系统：从正常的大脑和大脑中培养并从正常的大脑和大脑中进行培养，这些大脑和大脑与tamors pans tome tamors taumors taumors taumors taumors taumors tamors pans tamors tamors tome tamors tamors tom tamors wath tamors tamors。通过使用针对IBA1，CX3CR1等的抗体进行成像，可以看到肿瘤细胞与脑中常驻免疫细胞之间的相互作用。此外，通过改变培养条件，改变了微环境，并从每个部分中提取了微环境，并从纹状体和大脑表面和大脑系统中提取了组织，并使用了Assay System在该分析中进行了分析。 2。建立免疫细胞的评估系统：脑切片允许分析存在于大脑中的免疫反应相关细胞，例如小胶质细胞和星形胶质细胞，但由于血液流动的中断，很难分析系统性免疫反应与T细胞（如T细胞），例如T细胞和B细胞。为了验证周围免疫系统的影响，我们成功地仅从正常的脑和肿瘤的大脑中分离了免疫细胞，并通过流式细胞仪同时分析了10-15种细胞，以对微环境进行详细评估。 3。从具有不同免疫反应的肿瘤中新确定了三种类型的脑肿瘤干细胞，并开始对其基因表达谱分析。