ネジウイルスの特異なRNA合成システム

Nejivirus独特的RNA合成系统

基本信息

批准号：
22K07088
负责人：
藤田龍介
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07088/
关键词：
ネジウイルスサブゲノムRNA RdRp 昆虫ウイルスウイルス複製

项目摘要

本研究の目的は, ネジウイルスという新奇性の高いウイルスについて, 感染・増殖の基盤となるRNA合成メカニズムを解明し, ひとつのモデルとして確立することである. ネジウイルスは他のウイルスの RNA複製酵素 (RdRp) の機能では説明できないタイプのRNA合成を行っており, この詳細を解析することで, ウイルスが発展させてきた多様な分子機能の新たなる一面が明らかにすることを目的としている。本研究ではまず、ネジウイルスの持つ特異なサブゲノムRNA合成の方法について解明すべく、合成RNAを用いたレポーターアッセイシステムを構築することとした。ネジウイルスは感染細胞の中で、ORF2およびORF3をコードするサブゲノムRNAを生成するが、それぞれのサブゲノムRNAの鋳型となる対応したRNAは存在せず、鋳型はゲノムの逆鎖RNAであると考えられている。そこで、ネジウイルスの１種であるブストスウイルスを用いて、ORF2、ORF3をコードするサブゲノムRNAの5´末端の配列を基準に、逆鎖の配列を10ー60塩基持つ、領域の異なる配列をそれぞれ合成し、これにレポーターとなるLuciferase遺伝子を融合したRNAを合成した。この際、鋳型鎖RNAの3´末端へのポリAの付加、ならびに5´末端へのキャップの付加を行い、それぞれの修飾を持つRNAの細胞 (ヒトスジシマカ由来C6/36細胞) への導入を行った。今後はこれらの鋳型レポーターRNAを用いたウイルス感染細胞内でのサブゲノムRNAの合成能比較を行い、サブゲノムRNA合成に必要な配列の同定を進める予定である。また本研究材料であるブストスウイルスとは別に、野外捕集蚊から新規のネジウイルスを同定することに成功したため、次年度以降に計画しているウイルス種間の配列保存性の機能比較に用いる予定である。

这项研究的目的是阐明RNA合成的机理，RNA合成是一种新型病毒，是感染和增殖的基础，并将其确定为模型。线程病毒在某种类型中执行RNA合成，该类型无法通过其他病毒的RNA复制酶（RDRP）的功能来解释，并且通过分析此细节，目的是阐明该病毒所开发的各种分子功能的新方面。在这项研究中，我们首先决定使用合成RNA构建一个记者测定系统，以阐明螺纹病毒所具有的亚基因组RNA的特定方法。在受感染的细胞中，Nezivirus会产生编码ORF2和ORF3的亚基因组RNA，但是没有相应的RNA用作每个亚基因组RNA的模板，并且该模板被认为是基因组的反向RNA。因此，使用Bustos病毒是Negiviruse之一，我们合成了不同的区域序列，每个区域都具有10-60个反向链序列的碱基，使用该序列在第5'端的RNA编码ORF2和ORF3的5'末端，并合成了Luciferase Gene的合成RNA，并将其融合为Luciferase Gene，以便于Reporers。目前，将Polya添加到模板链RNA的3'端，并将CAP添加到5'端，并将带有每种修饰的RNA引入细胞中（C6/36细胞（C6/36细胞）（源自Adees aDimac）。将来，我们计划比较使用这些模板报告基因RNA的亚基因组RNA在病毒感染细胞中合成的能力，并确定亚基因组RNA合成所需的序列。除了这项研究的材料外，我们还成功地从现场捕获的蚊子中确定了一种新的线病毒，并将用于比较病毒物种之间的序列保守特征，该病毒物种计划在下一个财政年度及以后。