テトラヒドロビオプテリンによる神経・循環器系の機能調節と疾患治療への挑戦

使用四氢生物蝶呤挑战神经和循环系统的功能调节和疾病治疗

基本信息

批准号：
22K06871
负责人：
一瀬千穂
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

セピアプテリン還元酵素（SPR）遺伝子の第1エクソンの5’上流にloxPサイト、第2-第3エクソン間のイントロンにFRT-pgk-ネオマイシン耐性遺伝子-FRTとその3‘下流にloxPサイトを挿入したマウスと、ヒトドパミンβ水酸化酵素(DBH)プロモーター-Cre-ERTトランスジェニックマウスを交配し、Sprfl/fl, Cre-ERT、Sprfl/fl、Sprfl/+マウスを作成した。次いでこのマウスにタモキシフェン(Tam)を投与し、Spr遺伝子を誘導的に破壊したTamを投与しない段階で、Sprfl/fl, Cre-ERTマウス、Sprfl/flマウスでは、副腎（Ad）でのSPRの発現量はC57BL/6の5.3%および7.6%、Sprfl/+マウスでは47.3%に低下していた。Adのビオプテリン（Bio）, ノルエピネフリン（NE）, エピネフリン(Epi,) ドパミン（DA）の量はC57BL/6、Sprfl/fl、Sprfl/fl, Cre-ERT、 Sprfl/+間で有意差がなかった。Sprfl/fl, Cre-ERT、Sprfl/fl、C57BL/6 (6-7カ月齢、♀マウス、n=3)に対しTam 1 mgを連続5日間腹腔内投与し4週間後に組織の生化学的解析を行ったところ。Sprfl/fl, Cre-ERTマウスの副腎（Ad）でエクソンの除去が検出された。Tam を投与したSprfl/fl, Cre-ERTマウスのAdのBioはSprfl/fl、C57BL/6と差がなかったが、EpiおよびDAはC57BL/6に比べて有意に減少していた。Adでは髄質細胞でのBH4産生が低下しそれに伴ってDAと最終産物のEpiが減少したが、チロシン水酸化酵素（TH）のリン酸化状態を変化させるには十分ではないと考えられた。

在墨蝶呤还原酶（SPR）基因第一个外显子上游5'插入loxP位点，在FRT-pgk-新霉素抗性基因-FRT及其3'基因第二、第三外显子之间的内含子插入loxP位点小鼠与人多巴胺β-羟化酶（DBH）启动子-Cre-ERT转基因小鼠和Sprfl/fl杂交。创建了 Cre-ERT、Sprfl/fl 和 Sprfl/+ 小鼠。接下来，对这些小鼠给予他莫昔芬(Tam)，在未给予诱导性破坏Spr基因的Tam的阶段，Sprfl/fl、Cre-ERT小鼠的肾上腺(Ad)中的SPR降低，在C57BL/6和Sprfl/fl小鼠中表达水平分别为5.3%和7.6%，在Sprfl/+小鼠中下降至47.3%。 C57BL/6、Sprfl/fl、Sprfl/fl、Cre-ERT 和 Sprfl 之间 Ad 中生物蝶呤 (Bio)、去甲肾上腺素 (NE)、肾上腺素 (Epi) 和多巴胺 (DA) 的含量没有显着差异/+. Sprfl/fl、Cre-ERT、Sprfl/fl和C57BL/6（6-7月龄，雄性小鼠，n=3）连续5天腹腔注射Tam 1 mg，4天后进行组织生化分析我刚刚做了分析。在 Sprfl/fl、Cre-ERT 小鼠的肾上腺 (Ad) 中检测到外显子缺失。施用 Tam 的 Sprfl/fl、Cre-ERT 小鼠的 Ad Bio 与 Sprfl/fl、C57BL/6 没有差异，但与 C57BL/6 相比，Epi 和 DA 显着降低。在Ad中，髓质细胞中BH4的产生减少，DA和最终产物Epi相应减少，但这不足以改变酪氨酸羟化酶（TH）的磷酸化状态。