Development of immunoassays for bioactive polysaccharides in Poria and Ziziphi Fructus

茯苓、枣中生物活性多糖免疫分析方法的建立

基本信息

批准号：
22K06667
负责人：
田中宏幸
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tokyo University of Science, Yamaguchi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究課題は、漢方薬の約31％に配剤されているタイソウ（大棗）及び約32％に配剤されているブクリョウ（茯苓）の科学的品質評価法の確立を目指し、各々の生薬に含まれる特徴的な多糖を指標とした免疫化学的分析法を開発することを目的とする。タイソウおよびブクリョウは、補体活性化作用、がん細胞増殖抑制作用や抗炎症作用等を有する様々な多糖を含み、これらは重要な指標成分と考えられることから、申請者は各々の生薬に含まれる多糖に対するモノクローナル抗体（mAb）を作製し、続いて、迅速・簡便で信頼性のある酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)や免疫染色法の開発を進める。研究の後半では、確立した種々の免疫化学的分析法を生薬の品質評価や生体内における多糖の吸収、代謝、体内動態等の解析へ適用することで、生薬由来機能性多糖を対象とした免疫化学的分析法の有用性、実用性を明らかにする。令和４年度は、ブクリョウ、タイソウ由来水溶性多糖を認識するモノクローナル抗体（mAb）の作製を中心に行った。まず、各生薬の水性エキスから多糖画分を調製した。生薬エキスには様々な成分が含まれている。そこで、適切な透析膜を活用して、高分子の成分を含む試料を得た後、タンパク質をできる限り除くことで、多糖画分得ることに成功した。その後、各多糖エキスを免疫原としてマウスに感作を行った。その結果、血清中に各生薬多糖フラクションに特異性を有する抗体の産生をELISAにより確認することができた。今後は、抗体価が上昇した段階で細胞融合を実施した後、mAb産生ハイブリドーマの作製を進めていく計画である。

这项研究包括在每种原油中，旨在建立Tiso的科学质量评估方法（Daijujutsu），该方法分布在大约31％的草药中，约有32％的Bukuryo（Bukuryo）。基于特征多糖的分析方法。 Tiso和Bukryo包含各种多糖，具有互补激活，癌细胞生长抑制和抗炎作用，这些含量被认为是重要的指标，因此申请人包括每种粗抗体（MAB）的发展。多糖随后开发了快速，简单和可靠的酶结合物测量方法（ELISA）和免疫染色方法。在研究的后半部分，已确定的免疫化学分析方法应用于其粗制药物的质量评估，多糖的吸收，代谢以及人体动力学等的分析以及从原油药物。在折纸的第四年，我们专注于产生单克隆抗体（MAB），这些抗体（MAB）识别Bukkryo和Tiso衍生的水 - 溶解多糖。首先，从每种原油药物的水提取物中制备多糖。粗药物提取物包含各种成分。因此，在使用适当的透析膜获得包含聚合物成分的样品后，通过尽可能排除蛋白质，多糖成功。之后，每种多糖提取物对小鼠作为免疫力敏感。结果，ELISA能够确认在血清中每个原始药物多糖馏分中具有特异性的抗体的产生。将来，我们计划在抗体值升高后进行细胞融合后促进MAB产生杂交瘤的产生。