Research on the mechanism of reproductive communication between males and females via peptide sex pheromones

肽性信息素雌雄生殖通讯机制研究

基本信息

批准号：
22K06305
负责人：
中田友明
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nippon Veterinary and Life Science University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、異性の性行動を単一分子で誘起し得る雄性フェロモン（ソデフリン）と雌性フェロモン（アイモリン）が共に同定された四肢動物であるアカハライモリをモデルに、雌雄両性の性フェロモン応答処理中枢神経系と、その内分泌学的調節機序の詳細を解析することを目的としている。初年度にあたる本年は以下の5つの実験を行い、それぞれに一定の成果を得た。1. 雄性フェロモンソデフリンのノックアウト(KO)動物の作成：ソデフリンペプチドのコード領域上流にあるPAM配列を認識して当該ゲノムDNA配列に得意的な切断をするガイドRNAとCas9酵素をイモリ受精卵に顕微注入することで、ソデフリン遺伝子にNHEJ（非相同末端結合）の修復ミスに起因するフレームシフトを誘発させ、性フェロモンKO動物(F0)を作成した。今後、交配によって非モザイク性のF1動物を得て、解析を行う予定である。2. 今後の解析に必要なアルビノ個体の準備：ゲノム編集により作成したメラニンを持たないアルビノイモリのF0個体を得て、今後の蛍光シグナルでの解析を容易なものとした。3. イモリのcrystallinプロモーターのクローニング：水晶体で同プロモーター下流の蛍光タンパク質を発現させ、外来遺伝子導入マーカーとして発生初期に遺伝子導入を確認可能となる。4.複数のソデフリンパラログ・神経活動依存的に発現する最初期遺伝子（Egr-1およびArc）プロモーターのクローニング：それぞれ、性フェロモンの発現調節機構の解析や、フェロモン受容応答神経系の同定や解析に利用できる。5. 脳内の神経回路解析に有用な神経細胞標識を達成するBrainBowコンストラクトの作成：複数の蛍光タンパク質の発現を神経細胞ごとにランダムに起こすことで、個々の神経繊維の追跡が可能となるため、今後、同コンストラクトを導入したイモリが応答神経系の同定や解析に利用できる。

这项研究旨在分析使用红色呈红色的脂肪的性别和内分泌调节机制的中枢神经系统，该脂蛋白已被鉴定出来，其中雄性和女性信息素（Sodephrin）和雌性信息素（Aimorin）可以通过单分子诱导异性恋性行为，并具有单分子的机制。今年，第一年，我们进行了以下五个实验，每个实验都取得了一定的结果。 1。为雄性信息素蛋白创建淘汰（KO）动物：通过显微注射指南RNA和Cas9酶，识别sodephrin肽的编码区域上游的PAM序列，并将基因组DNA序列切割到Newt受精卵中的基因组DNA序列中，由nhej extiral of nhe he nhe nhe nhhe he nhe hem sermotial， Sodephrin基因，并创建性信息素KO动物（F0）。将来，将通过交配获得非摩西F1动物。 2。准备将来分析所需的白化病个体：通过基因组编辑获得了不包含黑色素的白化病个体的F0个个体，并促进了使用荧光信号的将来的分析。 3. Newt Crystallin启动子的克隆：启动子下游的荧光蛋白在晶状体中表达，从而可以在发育开始时确认基因转移为外国基因转移标记。 4。最早的基因（EGR-1和ARC）启动子的克隆以涉及多个sodephrin paralogues和神经活性的依赖方式表达的启动子：可用于分析性别信息素表达的机制，并识别和分析和分析信息素酮受体神经系统。 5。创建实现神经元标记的脑弓构建体可用于大脑中的神经回路分析：通过为每个神经元施用多种荧光蛋白，可以跟踪单个神经纤维，并且将来引入了构建体的NEWT可以使用来识别和分析响应式神经系统。