Molecular Mechanism of Glyceroglucolipids Involved in Cell Membrane Permeability of Gram-Positive Bacteria

甘油糖脂参与革兰氏阳性菌细胞膜通透性的分子机制

基本信息

批准号：
22K05377
负责人：
松岡聡
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

今年度の本研究では、分子機構が未解明なグリセロ糖脂質の膜透過性に関わる機能を明らかにするため、ugtP遺伝子を破壊したグリセロ糖脂質欠損株にチャネルタンパク質をコードする遺伝子破壊ライブラリーを導入し、ヨウ化プロピジウム(PI)の核様体染色を指標にしてPI透過性に関与する膜タンパク質を同定を試みた。その結果、6種類の膜輸送体タンパク質をコードする遺伝子を候補として同定した。さらに、これら遺伝子のプロモーター活性を野生株とグリセロ糖脂質欠損株で測定したところ有意な差は認められなかったことから、グリセロ糖脂質欠損による膜輸送体タンパク質の量的変化ではなく、機能（質）的変化が予想された。また、生理条件でグリセロ糖脂質量がどのように制御されているのかを理解するために、ugtPプロモーター領域とlacZの転写融合コンストラクトとugtP転写に関わると予想されるECFシグマ因子破壊株を用いてグリセロ糖脂質合成酵素遺伝子ugtPの転写制御を解析したところシグマMとシグマXが協調的にugtPの発現制御に関与する結果を得た。グリセロ糖脂質合成酵素UgtPは、アコレプラズマ属細菌やシロイヌナズナ由来の合成酵素とは異なる、1つの酵素が糖残基をジアシルグリセロールに段階的に付加する。この特異な酵素反応機構を分子レベルで明らかにするためにUgtPを大腸菌で大量発現・精製して結晶化を試みた。条件検討の結果結晶を得ることに成功したが、より良い結晶条件の検討が必要である。

在今年的研究中，为了阐明尚未阐明甘油甘油胆红素涉及的功能（尚未阐明），将编码通道蛋白编码的基因破坏库被引入甘油甘油糖脂中的缺乏菌株中，这些菌株破坏了与ugtp基因相关的ugte unge unde unde ungtp protious conce cons cugtp gene和cugtp prose comperien conse conte ugtp基因，并验证了拟南芥的质量。碘化物（PI）。结果，编码六种类型的膜转运蛋白蛋白的基因被鉴定为候选。此外，当这些基因的启动子活性是在野生和甘油糖脂缺陷菌株之间测量的时，未发现显着差异，并且预测了功能性（质量）变化，而不是由于甘油糖脂缺乏症而导致的膜转运蛋白的定量变化。此外，为了了解如何在生理条件下调节甘油糖脂含量，我们分析了使用UGTP启动子区域和lacz和acf sigma因子的转录量的转录融合构建体的转录融合构建体的转录融合构建体的转录融合构建，并发现SIGMA因素与SIGM涉及SSP的转录构建，并发现SIGM涉及SSP，并发现SIGM的转录，并发现SIGM的sigm Mottma，并发现SIGMA的特性。合作控制UGTP的表达。甘油甘油合酶UGTP是与Acholeplasma细菌和拟南芥合成酶不同的酶，一种酶在阶段将糖残基添加到二酰基甘油中。为了阐明在分子水平上的这种独特的酶反应机理，我们试图通过大肠杆菌中的大量表达和纯化来结晶UGTP。条件研究的结果成功地获得了晶体，但需要更好的晶体条件。