優性遺伝性成長ホルモン欠損モデルマウスの作製と成長ホルモン分泌不全発症機序の解明

显性遗传性生长激素缺陷模型小鼠的构建及生长激素分泌缺陷发病机制的阐明

• 批准号: 21K07849
• 负责人: 有安 大典
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07849/
• 关键词: 成長ホルモン分泌不全; トランスクリプトーム解析; 小胞体ストレス; 小胞体ストレスセンサー; ヒト化モデルマウス; GHRH受容体

優性遺伝性GH1遺伝子異常症モデルマウスにおけるGH分泌不全の分子生物学的機序を解明するため、マウスの内因性Gh遺伝子のexon 3をCRISPR/Cas9を用いて欠失させたモデルマウスを作製し、申請者らが先行研究で樹立したヒトGH1遺伝子ノックインマウスと同等か、より重症な表現型を得ることに成功した。このマウスを用いて以下2つのstrategyで研究を進めている。①小胞体に局在するexon3が欠失したGH(Δ3GH)が小胞体ストレスを引き起こすかどうか、マウス下垂体を用いたリアルタイムRTPCRやウェスタンブロッティング、TUNEL染色を行う。Xbp1遺伝子のスプライシング変化を検出する方法をスクリーニングとして用い、違いが見られた週数のマウスを用いてよりextensiveに解析を進める方針である。②Gh KOマウス(-/-)と、片アリルにΔ3Ghを有するマウス(-/Δ3)を用いて、下垂体のtranscriptome解析を行うことで、Δ3ＧＨによる下垂体細胞の転写産物への影響を網羅的に解析する。また、Δ3 GHを本来発現しない別の臓器にてCAGプロモーター下で発現させることで、下垂体で起こっている現象をより簡便に、より顕著に検出し、疾患の発症機序解明を目指す方法も模索している。内分泌臓器としては、分泌機構を持ち小胞体の発達した膵β細胞や、アクセスしやすい副腎などを考えている。組織量が採取しやすいものとして肝臓があげられるが小胞体などの分泌機構が異なるため注意が必要である。

为了阐明显性遗传性GH1基因疾病小鼠模型中GH分泌缺陷的分子生物学机制，我们利用CRISPR/Cas9成功创建了小鼠内源性Gh基因外显子3被删除的小鼠模型。获得与先前研究中建立的人类GH1基因敲入小鼠相当或更严重的表型。使用该鼠标，我们正在使用以下两种策略进行研究。 ① 为了确定内质网中缺乏外显子3的GH（Δ3GH）是否会引起内质网应激，我们将使用小鼠垂体进行实时RTPCR、Western blotting和TUNEL染色。我们计划使用一种检测Xbp1基因剪接变化的方法作为筛选方法，并使用观察到差异的年龄范围的小鼠进行更广泛的分析。 ②通过使用Gh KO小鼠（-/-）和1个等位基因带有Δ3Gh的小鼠（-/Δ3）进行垂体转录组分析，全面研究了Δ3GH对待分析垂体细胞转录物的影响。此外，通过在通常不表达Δ3GH的另一个器官中表达Δ3GH，可以更容易、更清楚地检测垂体中发生的现象，旨在阐明我正在研究的疾病的发病机制。为了某事。作为内分泌器官，我们考虑的是具有分泌机制和发达内质网的胰腺β细胞，以及易于接近的肾上腺。肝脏是容易采集大量组织的组织之一，但由于内质网等分泌机制不同，因此必须小心。