半月周性産卵リズムの形成機構：潮汐を伝える体内時計の関わりと分子基盤の解明

半月产卵节律的形成机制：阐明传递潮汐的生物钟的参与及其分子基础

• 批准号: 20H03288
• 负责人: 安東 宏徳
• 金额: $ 11.65万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03288/
• 关键词: 生殖神経内分泌系; 体内時計; 潮汐サイクル; 半月周リズム; 概潮汐時計; 月周リズム; 生殖リズム

本研究では、概潮汐時計の機能的分子基盤の解明を目指して、潮汐サイクルおよび月齢に同調して発現する遺伝子群を網羅的に探索すると共に、それらの遺伝子の発現抑制による半月周性の産卵行動リズムへの影響を検討する。また、概潮汐時計と概日時計から構成されると考えられるリズム発振機構による生殖神経内分泌系の周期的調節の機能形態学的基盤を解明する。さらに、より普遍的な生物リズムの研究としての展開を目指し、半月周性リズムのOntogenyを解明する。令和3年度は、次の3つの研究成果を得た。1）潮汐サイクルと半月周性リズムに関連する遺伝子群を探索する試料として、産卵リズムの異なる伊豆川奈と佐渡姫津において、大潮と小潮の日の夕刻にクサフグ成魚を捕獲して脳を採取した。2）潮汐サイクル/半月周性リズムを作る時計候補遺伝子の機能解析のため、Vivo-モルフォリノによる遺伝子発現抑制実験系を検討した。脳髄膜で作られる糖たんぱく質であるエペンジミン（EPN）を標的遺伝子として、Vivo-モルフォリノ(EPN-MO)の配列、投与量、投与方法を検討した。また、ウェスタンブロット法と免疫染色法を用いたEPNタンパク質の解析系を確立した。EPN-MOを投与した個体では、遊泳阻害が見られたが、EPNタンパク質量の変化は検出されなかった。3）クサフグ仔稚魚に潮汐サイクルや月齢に同調したリズムがあるのかどうかを明らかにするため、産卵期に親魚を採集して人工授精を行い、仔稚魚を育成した。DanioVisionを用いて、クサフグ仔稚魚の自発行動リズムを解析した結果、成長段階によって明暗周期に関して自発行動リズムが異なることや明暗の切り替え時に自発行動量が高くなることなど、クサフグが独自の光応答性を持つ可能性が示された。さらに、EthoVision XTを用いたクサフグ幼魚の自発行動解析系を確立した。

在这项研究中，为了阐明潮汐鞋时钟的功能性分子基础，它可以全面搜索潮汐周期，并通过抑制半月份的鸡蛋同步表达潮汐周期和基因组。这些基因的表达检查对行为节奏的影响。此外，通过节奏振荡机制对幽灵神经内分泌系统进行定期调整的功能实施例，该机制被认为是从粘性的潮汐时钟和丘脑时钟配置的。此外，我们将阐明半月临床节奏的本体发育，目的是作为对更普遍的生物节奏的研究。在第三年，获得了以下三个研究结果。 1）作为寻找与潮汐周期和半月周围节奏有关的基因组的样本，izu kawana和sado himezu被捕获，它们具有不同的产卵节奏，并在潮汐和小潮汐天的傍晚收集，并收集大脑大脑。 2）潮汐循环/半月外节律，以创建基因时钟候选者，并检查了Vivo-morfolino的基因表达抑制实验。使用gedty-蛋白（EPN）（EPN）（EPN）的序列，剂量和给药方法（EPN-MO）作为靶基因，一种由脑部脑膜制成的糖蛋白。此外，还建立了使用Western印迹法和免疫染色方法对EPN蛋白的分析系统。在施用EPN-MO的个体中可以看到游泳抑制作用，但未检测到EPN蛋白质质量的变化。 3）为了澄清kusafugu弯曲的炸薯条是否具有调节潮汐周期和潮汐周期的年龄的节奏，我们在产卵期收集了家长鱼，以进行人工授精以滋养大惊小怪。由于分析了使用Daniovision（Kusafugu）独特的光学响应Daniovision的Kusafugu Bent Fry的自发行为节奏，例如，在光和黑暗周期中自发性的行为节奏是不同的，根据生长阶段和自发活动的增加，这一事实是不同的在光线和黑暗中切换时。此外，还建立了使用Ethovision XT对Kusafugu鱼进行的自发行为分析。

项目成果

アカテガニの半月周性繁殖リズムの生理機構の理解に向けて

理解日本红蟹半月繁殖节律的生理机制

• 发表时间: 2021
• 作者: 豊田賢治;近藤裕介;鈴木信雄;大平剛;安東宏徳
• 通讯作者: 安東宏徳

Dim light at night stimulates melatonin production and may influence the expression of the GnRH, GnIH, and kisspeptin genes in the grass puffer

夜间昏暗的灯光会刺激褪黑激素的产生，并可能影响草鲀体内 GnRH、GnIH 和 Kisspeptin 基因的表达

• 发表时间: 2020
• 作者: Md. Mahiuddin Zahangir;Weronika Palkowska;丸山雄介;服部淳彦;安東宏徳
• 通讯作者: 安東宏徳

佐渡島沿岸におけるイボカギナマコの分布及び棲息環境の解明

佐渡岛沿岸伊波卡吉海参的分布和栖息地的阐明

• 发表时间: 2021
• 作者: 片田祐真;Chen Junfeng;沖村光祐;Guh Ying-Jey;中山友哉;丸山迪代;山口大輝;安東宏徳;佐藤綾人;吉村崇;豊田賢治，近藤裕介，鈴木信雄，大平剛，安東宏徳;江野脩太，片田祐真，黒川大輔，豊田賢治，飯田碧，吉村崇，安東宏徳;豊田賢治，大平剛，安東宏徳;浦野明央，小沼健，北橋隆史，安東宏徳，福若雅章，伴真俊，兵藤晋;鈴木倫明，安東宏徳，前田英雅，若林耕治;片田祐真，Chen Junfeng，沖村光祐，Guh Ying-Jey，中山友哉，丸山迪代，安東宏徳，吉村崇;梅田樹，中島崇志，大森紹仁
• 通讯作者: 梅田樹，中島崇志，大森紹仁

バングラデシュ農業大学/チャットグラム獣医動物大学(バングラデシュ)

孟加拉国农业大学/吉大兽医与动物大学（孟加拉国）

佐渡島におけるアカテガニの半月周性繁殖リズム

佐渡岛红蟹的半月繁殖节律

• 发表时间: 2021
• 作者: 豊田賢治;大平剛;安東宏徳.
• 通讯作者: 安東宏徳.