創薬を指向するプロスタグランジンの新規細胞外放出輸送担体の同定と機能解析

用于药物发现的新型前列腺素细胞外释放转运蛋白的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
16J03057
负责人：
田中伸明
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03057/
关键词：
プロスタグランジン輸送担体 ABCC4

项目摘要

今年度は前年度の結果から明らかとなったH+勾配依存的プロスタグランジン（PG）E2輸送のプロファイルを解析した。また、PGD2を輸送基質とすることが明らかとなったATP-binding cassette transporter C4（ABCC4）について、抗原刺激後の肥満細胞でPGD2放出に寄与することを検証した。以上の検証によりPG・トロンボキサンの細胞外放出過程を解明することを試みた。【研究成果の具体的内容】H+勾配依存的輸送速度はPGE2 500 μMまでに飽和性を示さなかった。また、H+勾配依存的PGE2輸送に対してアセチルサリチル酸、サリチル酸、p-ニトロ安息香酸はそれぞれ64%、62%、70%の有意な阻害効果を示した。このことから、芳香族モノカルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送に大きく寄与する可能性を示した。抗原刺激により脱顆粒を引き起こす肥満細胞モデルとして汎用されるRBL-2H3細胞を用い、DNP-HSA（50 ng/mL）による抗原刺激後のPGD2放出に対してABCC4選択的阻害薬Ceefourin 1（2.5 μM）を加えたところ、細胞外PGD2量は22%有意に減少した。また、この時薬液中のβ-hexosaminidase活性に変化はみられなかった。このことから、RBL-2H3細胞においても ABCC4はPGD2細胞外放出に寄与し、かつ脱顆粒とは独立した細胞外放出経路として機能していることを明らかとした。【研究成果の意義・重要性等】芳香族カルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送を担う可能性を示し、分子同定に有用な情報になるものと期待される。また、肥満細胞においてABCC4は脱顆粒に依存しないPGD2放出経路として機能し、アレルギーのみならずがん組織における血管新生抑制作用の発現に寄与する可能性が示唆された。

今年，我们分析了H+梯度依赖性前列腺素（PG）E2运输概况，从上一年的结果中揭示了。此外，我们研究了ATP结合盒转运蛋白C4（ABCC4）被证明用作运输底物，在抗原刺激后在肥大细胞中释放了PGD2。通过上述验证，我们试图阐明PG和血栓烷的细胞外释放过程。 [研究结果的特定含量] H+梯度依赖性运输速率显示PGE2最高为500μm。此外，对H+梯度依赖性PGE2转运的乙酰基酸酸，水杨酸和P-硝基苯甲酸的显着抑制作用分别为64％，62％和70％。这表明使用芳香族单羧酸作为传输底物的传输载体可能对H+梯度依赖性PGE2转运产生显着贡献。使用RBL-2H3细胞（通常用作抗原刺激时会导致脱粒的肥大细胞模型），将Ceefourin 1（2.5μm）（2.5μM）（ABCC4选择性抑制剂）添加到PGD2释放后，用DNP-HSA（50 ng/ml）释放了抗原刺激（50 ng/ml），可降低Extracellullulormulormular pgd2％。此外，在化学溶液中的β-己糖胺酶活性中未观察到任何变化。这表明ABCC4还有助于PGD2细胞外释放，并且起着与RBL-2H3细胞中脱粒无关的细胞外释放途径。 [研究结果的显着性和重要性]预计，使用芳族羧酸作为传输底物的运输载体可能负责H+梯度依赖性PGE2转运，并且将是分子鉴定的有用信息。还有人提出，ABCC4在肥大细胞中充当非固定依赖性的PGD2释放途径，不仅可能有助于过敏，而且对癌症组织中血管生成抑制作用的发展产生。