創薬を指向するプロスタグランジンの新規細胞外放出輸送担体の同定と機能解析

用于药物发现的新型前列腺素细胞外释放转运蛋白的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
16J03057
负责人：
田中伸明
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03057/
关键词：
プロスタグランジン輸送担体 ABCC4

项目摘要

今年度は前年度の結果から明らかとなったH+勾配依存的プロスタグランジン（PG）E2輸送のプロファイルを解析した。また、PGD2を輸送基質とすることが明らかとなったATP-binding cassette transporter C4（ABCC4）について、抗原刺激後の肥満細胞でPGD2放出に寄与することを検証した。以上の検証によりPG・トロンボキサンの細胞外放出過程を解明することを試みた。【研究成果の具体的内容】H+勾配依存的輸送速度はPGE2 500 μMまでに飽和性を示さなかった。また、H+勾配依存的PGE2輸送に対してアセチルサリチル酸、サリチル酸、p-ニトロ安息香酸はそれぞれ64%、62%、70%の有意な阻害効果を示した。このことから、芳香族モノカルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送に大きく寄与する可能性を示した。抗原刺激により脱顆粒を引き起こす肥満細胞モデルとして汎用されるRBL-2H3細胞を用い、DNP-HSA（50 ng/mL）による抗原刺激後のPGD2放出に対してABCC4選択的阻害薬Ceefourin 1（2.5 μM）を加えたところ、細胞外PGD2量は22%有意に減少した。また、この時薬液中のβ-hexosaminidase活性に変化はみられなかった。このことから、RBL-2H3細胞においても ABCC4はPGD2細胞外放出に寄与し、かつ脱顆粒とは独立した細胞外放出経路として機能していることを明らかとした。【研究成果の意義・重要性等】芳香族カルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送を担う可能性を示し、分子同定に有用な情報になるものと期待される。また、肥満細胞においてABCC4は脱顆粒に依存しないPGD2放出経路として機能し、アレルギーのみならずがん組織における血管新生抑制作用の発現に寄与する可能性が示唆された。

今年，我们分析了 H+ 梯度依赖性前列腺素 (PG) E2 转运的概况，这是从前一年的结果中揭示的。我们还验证了 ATP 结合盒转运蛋白 C4 (ABCC4)，已被证明使用 PGD2 作为转运底物，有助于抗原刺激后肥大细胞中 PGD2 的释放。通过上述验证，我们试图阐明PG/血栓烷向细胞外释放的过程。 [研究结果的具体细节] H+梯度依赖的传输速率在PGE2达到500μM时并未表现出饱和。此外，乙酰水杨酸、水杨酸和对硝基苯甲酸对 H+ 梯度依赖性 PGE2 转运显示出显着的抑制作用，分别达 64%、62% 和 70%。这表明使用芳香族一元羧酸作为转运底物的转运载体可能对 H+ 梯度依赖性 PGE2 转运有显着贡献。使用 RBL-2H3 细胞（通常用作肥大细胞模型，在抗原刺激后引起脱颗粒），我们使用 ABCC4 选择性抑制剂 Ceefourin 1 (2.5 μM) 来抑制 DNP-HSA (50 ng/mL) 抗原刺激后 PGD2 的释放）），细胞外PGD2的量显着减少22%。另外，此时药液中的β-氨基己糖苷酶活性没有变化。这些结果表明，ABCC4 还有助于 RBL-2H3 细胞中 PGD2 的细胞外释放，并作为独立于脱颗粒的细胞外释放途径发挥作用。 [研究成果的意义和重要性]本研究表明以芳香族羧酸为运输底物的运输载体在H+梯度依赖性PGE2运输中发挥作用的可能性，有望为分子鉴定提供有用的信息。此外，ABCC4 在肥大细胞中作为一种不依赖于脱粒的 PGD2 释放途径发挥作用，这表明它不仅可能导致过敏，而且还有助于在癌症组织中表达抗血管生成作用。