鯨類の妊娠に特異的なタンパクに関する免疫生化学的および分子生物学的研究

鲸类妊娠特异性蛋白的免疫生化和分子生物学研究

• 批准号: 09J01649
• 负责人: 盛田 祐加
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01649/
• 关键词: alpha-fetoprotein; pregnancy-associated glycoprotein; 免疫化学的測定系; cDNAクローニング; リアルタイムRT-PCR; 妊娠特異タンパク; スジイルカ; 鯨類; α-フェトプロテイン; 精製

本研究は鯨類における繁殖生理機構の解明および鯨類において臨床例のない妊娠特異タンパクの繁殖管理への応用を目的としている。具体的には胎児由来のalpha-fetoprotein (AFP)および胎盤由来のpregnancy-associated glycoprotein (PAG)に着目し、本年度はスジイルカAFP測定系の確立を行い、血清中のAFP量を調べるとともにAFP mRNAの発現性状を解析した。一方PAGについてはcDNAクローニングを行い、一次構造の解明を行った。胎児血清中のAFP濃度は胎児の発育に伴い濃度が減少する傾向が見られ、妊娠雌血清については妊娠中期に高値を示す傾向がみられた。さらにリアルタイム定量RT-PCRを用いて胎児および妊娠雌の各器官の測定を行ったところ、胎児肝臓において高レベルの発現が認められた。また胎児肝臓および胎児胎盤における同mRNAの妊娠進行に伴う変化を調べたところ、肝臓では発育にともない減少する傾向がみられたが、胎盤ではほとんど発現がみられなかった。以上により妊娠期間中のイルカ類において、AFPの由来は主に胎児肝臓であることが明らかとなった。また妊娠雌におけるAFPの血中レベルとその変動が明らかとなり、妊娠成立・維持の指標とする際に必要な基礎的知見が得られた。一方胎盤組織よりPAGのクローニングを行った結果、6種類のクローンが確認され、得られた同塩基配列は397-404個のアミノ酸翻訳領域から構成されていた。同アミノ酸配列は他の陸上哺乳類PAGと高い相同性を示したことより本種のPAGをコードしていると考えられ、鯨類で初めて遺伝子レベルでのPAGの存在があきらかとなった。AFPおよびPAGに関する基礎知見の集積は未知なる鯨類の繁殖生理学を理解する上で重要で意義深く、これら分子を鯨類の飼育・生態管理へ応用する際に必要不可欠な成果である。

本研究的目的是阐明鲸目动物的生殖生理机制，并将在鲸目动物中没有临床实例的妊娠特异性蛋白应用于生殖管理。具体来说，我们重点研究了源自胎儿的甲胎蛋白（AFP）和源自胎盘的妊娠相关糖蛋白（PAG）。今年，我们建立了条纹海豚AFP测量系统，用于检查血清中AFP的含量并测量分析AFP mRNA的表达特征。另一方面，对于PAG，进行了cDNA克隆并阐明了一级结构。胎儿血清中的AFP浓度随着胎儿的生长而趋于降低，妊娠女性血清中的AFP浓度往往在妊娠中期呈现较高值。此外，当使用实时定量RT-PCR测量胎儿和怀孕女性的各个器官时，在胎儿肝脏中观察到高水平的表达。此外，当我们研究胎儿肝脏和胎儿胎盘中相同mRNA随妊娠进展的变化时，我们发现随着肝脏的生长，表达趋于减少，但在胎盘中几乎没有观察到表达。上述结果表明，AFP主要来源于妊娠期海豚的胎肝。此外，还阐明了妊娠女性血液中AFP的水平及其波动，为利用其作为妊娠建立和维持的指标提供了必要的基础知识。另一方面，从胎盘组织克隆PAG的结果，确认了6种克隆，获得的相同碱基序列由397-404个氨基酸的翻译区组成。由于相同的氨基酸序列与其他陆地哺乳动物的PAG表现出高度同源性，因此被认为编码了该物种的PAG，并首次在基因水平上揭示了鲸目动物中PAG的存在。 AFP和PAG基础知识的积累对于了解鲸目动物未知的生殖生理具有重要意义，也是将这些分子应用于鲸目动物繁育和生态管理的重要成果。

项目成果

Characterization of alpha-fetoprotein in fetal striped dolphin (Stenella coeruleoalba) : purification of protein product and molecular cloning of the corresponding transcript

胎儿条纹海豚 (Stenella coeruleoalba) 中甲胎蛋白的表征：蛋白产物的纯化和相应转录物的分子克隆

• 发表时间: 2011
• 影响因子: 0.9
• 作者: Yuka Morita; Naoshi Hiramatsu; Toshiaki Fujita; Haruna Amano; Takashi Todo; Akihiko Hara
• 通讯作者: Akihiko Hara

いるかの妊娠がしりたい

我想知道伊鲁卡是否怀孕了

• 发表时间: 2011
• 作者: 盛田祐加