RNA修飾の欠損と自己免疫疾患発症の分子機構

RNA修饰缺陷与自身免疫性疾病发生的分子机制

基本信息

批准号：
20659044
负责人：
剣持直哉
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

タンパク質をコードしていないRNA (ncRNA)が多数発見され、生体システムにおける重要性が明らかになりつつある。一方、これらのRNAは通常種々の修飾を受けているが、その意義は全く不明である。RNA修飾と自己免疫疾患との関連を明らかにするために、本年度は、SLE患者で自己抗原となるrRNAに対する人工抗体の作製を行うとともに、ゼブラフィッシュにおいてRNA修飾に働く核小体の低分子RNA(snoRNA)の機能を阻害し、生体におけるRNA修飾の役割を検討した。1. 人工抗体ライブラリーを用いた抗RNA抗体の作製ファージディスプレイ型の人工抗体ライブラリーから、28SrRNAの自己抗体結合部位を認識する抗体クローンを8種類単離した。得られた人工抗体のrRNAに対する特異性はELISA法にて確認した。抗体クローンの塩基配列を決定しデータベースを解析した結果、新規の抗体であることが明らかになった。2. ゼブラフィッシュにおけるsnoRNAの機能阻害とRNA修飾snoRNAは通常イントロンにコードされている。そこで、U22、U26、U44、U78の各snoRNAについて、ゼブラフィッシュにおいてこれらsnoRNAがコードされているイントロンのスプライシングを阻害した。その結果、ゼブラフィッシュ胚に共通した表現型として、発育遅滞、頭部の形成不全、色素沈着の遅れなどが観察された。また、いずれも約1週間で致死となった。一方、U26のノックダウン胚から抽出したrRNAを用いて修飾の状態を質量分析計で調べたところ、U26が標的とする部位の修飾が低減していた。これらの結果より、ゼブラフィッシュの初期発生においてRNA修飾が重要な役割を果たしていることが初めて明らかになった。

许多非蛋白质编码 RNA (ncRNA) 已被发现，它们在生物系统中的重要性也越来越明显。另一方面，这些RNA通常会经历各种修饰，但其意义却完全未知。为了阐明RNA修饰与自身免疫性疾病之间的关系，今年我们将创建针对SLE患者自身抗原rRNA的人工抗体，并开发核仁中作用于斑马鱼RNA修饰的小分子RNA我们抑制了 (snoRNA) 的功能并研究了 RNA 修饰在生物体中的作用。 1.使用人工抗体文库制备抗RNA抗体从噬菌体展示型人工抗体文库中分离出识别28S rRNA的自身抗体结合位点的八种类型的抗体克隆。通过ELISA方法确认所获得的人工抗体针对rRNA的特异性。确定抗体克隆的核苷酸序列并分析数据库的结果表明，它是一种新抗体。 2. 斑马鱼snoRNA功能的抑制和RNA修饰 snoRNA通常在内含子中编码。因此，我们抑制了斑马鱼中编码 U22、U26、U44 和 U78 snoRNA 的内含子的剪接。结果，观察到斑马鱼胚胎的常见表型，包括发育迟缓、头部发育不全和色素沉着延迟。所有病例均在大约一周内死亡。另一方面，当使用从U26敲低胚胎提取的rRNA使用质谱仪检查修饰状态时，发现U26靶向位点的修饰减少。这些结果首次揭示了RNA修饰在斑马鱼早期发育中发挥着重要作用。