脂肪蓄積阻害作用を示す環状ペプチド(-)-テルナチンの生物有機化学的研究

环肽(-)-ternatin抑制脂肪堆积作用的生物有机化学研究

基本信息

批准号：
20651058
负责人：
上村大輔
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

(-)-テルナチンの標的分子を同定するために、本化合物を導入したプローブの合成を行った。まず始めに、リンカーを介してテルナチンとビオチンを結合したケミカルプローブの合成を試みた。しかし、各種条件を検討したが、アジドとアセチレンの連結反応(クリックケミストリー)が進行せずこのルートを断念した。そこで、東北大学大学院薬学研究科叶准教授との共同研究により、UV照射のみで化合物を連結可能なフォトリンカーを用いて、プローブの合成を試みた。構造活性相関より得た知見より、活性型テルナチンと非活性型テルナチンを選択した。そして、これら化合物を導入したポジティブプローブとネガティブプローブの合成を行い、2種類のプローブの合成に成功した。まず、何も化合物の導入されていないフォトプローブを用いて分化誘導5日目の無細胞抽出液から、プローブに非特異的に結合するタンパク質を除いた。次いで、活性型と非活性型のテルナチンを含むフォトリンカーを用いてプルダウンアッセイを行った。そして、得られたタンパク質を電気泳動により分析を行った結果、ポジティブプローブに特異的に結合するタンパク質のバンド(約60kDaと90kDa)を見いだすことに成功した。現在、これらのバンドを切り出して、MALDI-TOF-MASSによる解析を勧めている。タンパク質同定後は、それを足がかりとして脂肪蓄積メカニズムの解明を行う予定である。また、より合成容易な同族体の合成を行い、生体内試験を継続させている。

为了鉴定(-)-ternatin的靶分子，我们合成了掺有该化合物的探针。首先，我们尝试合成一种化学探针，其中特纳素和生物素通过接头连接。然而，考虑到各种条件后，叠氮化物和乙炔之间的连接反应（点击化学）没有进行，因此这条路线被放弃。因此，通过与东北大学药学研究生院卡诺副教授的共同研究，我们尝试使用仅通过紫外线照射即可连接化合物的光连接剂来合成探针。基于构效关系获得的知识，选择活性ternatin和非活性ternatin。然后他们合成了掺入这些化合物的阳性和阴性探针，并成功合成了两种类型的探针。首先，在分化诱导的第5天，使用未引入化合物的光探针从无细胞提取物中除去与探针非特异性结合的蛋白质。接下来，使用含有活性和非活性形式特纳汀的光联剂进行下拉测定。对获得的蛋白质进行电泳分析，结果成功找到了与阳性探针特异性结合的蛋白质条带（约60 kDa和90 kDa）。目前，我们建议切出这些条带并使用 MALDI-TOF-MASS 对其进行分析。在鉴定出这种蛋白质后，他们计划将其用作阐明脂肪积累机制的跳板。我们还正在合成一种更容易合成的同系物并继续进行体内测试。