健全な神経発達の為に新生児の血液脳関門がもつ機能性脂質供給ルート解明と投与設計

阐明新生儿血脑屏障的功能性脂质供应途径和给药设计，促进神经健康发育

基本信息

批准号：
20650125
负责人：
友廣岳則
金额：
$ 2.11万
依托单位：
University of Toyama
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

注意欠陥多動性障害の改善効果を有する機能性脂質の一つ、ドコサヘキサエン酸(DHA)の血液-組織関門を介した輸送については以前不明である。そこで、DHA輸送担体の実体を明らかにするため、神経組織の中でも特にDHA含有量が多い視細胞に着目し、視神経への栄養供給を主に担う外側血液網膜関門(oBRB)におけるDHA供給ルート解明を試みた。ヒトoBRBモデル細胞であるARPE-19細胞への[^<14>C]DHA取り込みを解析した結果、時間依存的に取り込まれ、その初期取り込み速度は17μL/(min・mg protein)であった。さらに、非標識体DHA共存下によってARPE-19細胞への[^<14>C]DHA取り込みは阻害され、そのIC_<50>値は約10-100μMと推定された。さらに、各種脂肪酸による[^<14>C]DHA取り込みに対する阻害効果を検討した結果、リノール酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸によって阻害され、オレイン酸によって阻害されなかった。従って、DHAはARPE-19細胞に何らかの脂肪酸選択的な輸送機構を介して取り込まれることが示唆された。また、前年度の研究から光反応性DHAプローブを用いてDHA結合タンパク質を精製可能である事が示唆された。oBRBの実体である網膜色素上皮細胞をサンプルとして、光反応性DHAプローブを用いて回収したタンパク質をMALDI-TOF/MS解析を行った結果、ビタミンA関連タンパク質が各種同定された。今後、同定したタンパク質がDHA輸送機能を有するか、検討を進める予定である。

二十二碳六烯酸 (DHA) 是一种可以改善注意力缺陷多动障碍的功能性脂质，其通过血液组织屏障的转运尚不清楚。因此，为了阐明DHA转运载体的实质，我们以神经组织中DHA含量特别高的感光细胞为研究对象，阐明了外血视网膜屏障（oBRB）中的DHA供给途径，即主要负责给视神经提供营养。对人oBRB模型细胞ARPE-19细胞的[^ 14 C]DHA摄取进行分析，结果显示其摄取具有时间依赖性，初始摄取率为17μL/(min·mg蛋白质) ）。此外，在未标记的DHA存在下，[ 14 C]DHA摄入ARPE-19细胞受到抑制，并且其IC 50 值估计为约10-100μM。此外，我们研究了各种脂肪酸对[^ 14 C]DHA摄取的抑制作用，并且发现它被亚油酸、花生四烯酸和二十碳五烯酸抑制，但不被油酸抑制。因此，有人认为 DHA 通过某种脂肪酸选择性转运机制被 ARPE-19 细胞吸收。此外，去年的研究表明，使用光反应性 DHA 探针纯化 DHA 结合蛋白是可能的。使用作为oBRB的物质的视网膜色素上皮细胞，通过光反应性DHA探针回收的蛋白质进行MALDI-TOF/MS分析，结果鉴定出多种维生素A相关蛋白质。未来，我们计划研究所鉴定的蛋白质是否具有DHA转运功能。