ＧＰＩアンカー型蛋白質の輸送機構の解明

阐明 GPI 锚定蛋白的转运机制

基本信息

批准号：
14J07702
负责人：
平田哲也
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカー型蛋白質の輸送機構解明を目的として研究を行った。前年度で報告者は、GPIアンカー型蛋白質の輸送に関与する遺伝子の同定を試みた。その結果、エンドソームからトランスゴルジ網(TGN)への逆行輸送に関わるGARP複合体のサブユニット、VPS51,VPS52,VPS54を同定した。今年度は、GARP複合体のKO細胞におけるGPIアンカー型蛋白質の輸送遅延を過剰発現によりレスキューできる分子の探索を行った。VPS54-KO細胞にcDNAライブラリーを導入し、GPIアンカー型蛋白質の輸送遅延がレスキューされた細胞をセルソータで濃縮し、次世代シークエンサーによりcDNAの配列を決定した。その結果、機能未知の6回膜貫通型蛋白質と予想されるTMEM87Aを同定した。TMEM87Aの過剰発現によりVPS54-KO細胞におけるGPIアンカー型蛋白質及び膜貫通型蛋白質の輸送遅延はレスキューされた。TMEM87Aによる輸送異常のレスキューが直接的であるか間接的であるかを調べるために、VPS54-KO細胞にTMEM87Aを過剰発現させ、コレラ毒素Bサブユニット(CTxB)のTGNへの逆行輸送を解析した。その結果、TMEM87Aの過剰発現によりCTxBの逆行輸送異常がレスキューされた。以上の結果から、TMEM87AによるVPS54KO細胞の順行輸送のレスキューは間接的なものであり、TMEM87Aはエンドソーム-TGN間の逆行輸送経路で機能する分子である可能性が示唆された。GPIアンカーのイノシトール脱アシル化はGPIアンカー型蛋白質の効率的な輸送に必須である。そこで、本年度はGPIイノシトール脱アシル化に関与する分子の同定も行った。ヒト半数体細胞株と次世代シークエンス解析を利用して、GPIイノシトール脱アシル化に関与する遺伝子を同定した。

该研究的目的是阐明糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚固蛋白的转运机制。在上一年，记者试图识别涉及GPI锚蛋白运输的基因。结果，我们确定了从内体到跨加利基网络（TGN）的逆行转运的GARP复合物的亚基：VPS51，VPS52和VPS54。今年，我们搜索了可以通过过表达来挽救GARP复合物KO细胞中GPI锚蛋白延迟转运的分子。将cDNA文库引入了VPS54-KO细胞中，并将因GPI锚蛋白延迟运输而救出的细胞富含在细胞分类器中，并通过下一代测序仪确定cDNA序列。结果，鉴定出具有未知功能的六跨膜蛋白的TMEM87A。 TMEM87A的过表达挽救了VPS54-KO细胞中GPI锚和跨膜蛋白运输的延迟。为了调查TM87A转运异常的营救是直接的还是间接的，在VPS54-KO细胞中TMEM87A过表达，并分析了霍乱毒素B亚基（CTXB）向TGN的逆行转运。结果，TMEM87A过表达挽救了CTXB逆行转运的异常。上述结果表明，TMEM87A的VPS54KO细胞向前摩托转运的拯救是间接的，这表明TMEM87A可能是一个在内体和TGN之间逆行转运路径中起作用的分子。 GPI锚定的肌醇脱酰化对于有效运输GPI锚蛋白至关重要。因此，今年我们还确定了参与GPI肌醇脱酰化的分子。人单倍体细胞系和下一代测序分析用于鉴定参与GPI肌醇脱酰化的基因。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

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专利数量（0）

PGAP4 is a GPI-GalNAc transferase for generating GPI-anchor side chain

PGAP4 是一种 GPI-GalNAc 转移酶，用于生成 GPI 锚定侧链

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tetsuya Hirata;Morihisa Fujita;Shota Nakamura;Daisuke Motooka;Noriyuki Kanzawa;Yoshiko Murakami;Yusuke Maeda;Taroh Kinoshita
通讯作者：
Taroh Kinoshita

Endosome-to-TGN retrograde transport mediated by GARP affects post-Golgi anterograde transport and glycosylation.

GARP 介导的内体到 TGN 逆行转运影响高尔基体后顺行转运和糖基化。

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
平田哲也;藤田盛久;中村昇太;村上良子;前田裕輔;木下タロウ
通讯作者：
木下タロウ

PGAP4, a multipass Golgi membrane protein, is GPI-GalNAc transferase for generating GPI-anchor side chain

PGAP4 是一种多通道高尔基体膜蛋白，是用于生成 GPI 锚定侧链的 GPI-GalNAc 转移酶

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tetsuya Hirata;Morihisa Fujita;Shota Nakamura;Daisuke Motooka;Noriyuki Kanzawa;Yoshiko Murakami;Yusuke Maeda;Taroh Kinoshita
通讯作者：
Taroh Kinoshita

GPI 側鎖の生合成に必須である GPI-N-アセチルガラクトサミン転移酵素の同定

GPI 侧链生物合成必需的 GPI-N-乙酰半乳糖胺转移酶的鉴定