ＧＰＩアンカー型蛋白質の輸送機構の解明

阐明 GPI 锚定蛋白的转运机制

基本信息

批准号：
14J07702
负责人：
平田哲也
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカー型蛋白質の輸送機構解明を目的として研究を行った。前年度で報告者は、GPIアンカー型蛋白質の輸送に関与する遺伝子の同定を試みた。その結果、エンドソームからトランスゴルジ網(TGN)への逆行輸送に関わるGARP複合体のサブユニット、VPS51,VPS52,VPS54を同定した。今年度は、GARP複合体のKO細胞におけるGPIアンカー型蛋白質の輸送遅延を過剰発現によりレスキューできる分子の探索を行った。VPS54-KO細胞にcDNAライブラリーを導入し、GPIアンカー型蛋白質の輸送遅延がレスキューされた細胞をセルソータで濃縮し、次世代シークエンサーによりcDNAの配列を決定した。その結果、機能未知の6回膜貫通型蛋白質と予想されるTMEM87Aを同定した。TMEM87Aの過剰発現によりVPS54-KO細胞におけるGPIアンカー型蛋白質及び膜貫通型蛋白質の輸送遅延はレスキューされた。TMEM87Aによる輸送異常のレスキューが直接的であるか間接的であるかを調べるために、VPS54-KO細胞にTMEM87Aを過剰発現させ、コレラ毒素Bサブユニット(CTxB)のTGNへの逆行輸送を解析した。その結果、TMEM87Aの過剰発現によりCTxBの逆行輸送異常がレスキューされた。以上の結果から、TMEM87AによるVPS54KO細胞の順行輸送のレスキューは間接的なものであり、TMEM87Aはエンドソーム-TGN間の逆行輸送経路で機能する分子である可能性が示唆された。GPIアンカーのイノシトール脱アシル化はGPIアンカー型蛋白質の効率的な輸送に必須である。そこで、本年度はGPIイノシトール脱アシル化に関与する分子の同定も行った。ヒト半数体細胞株と次世代シークエンス解析を利用して、GPIイノシトール脱アシル化に関与する遺伝子を同定した。

我们进行了研究以阐明锚固蛋白的运输机制。在上一年，记者试图鉴定涉及GPI锚定蛋白运输的基因。结果，确定了参与从末端重传到throsgoloji（TGN）的重传中的GARP复合亚基，VPS51，VPS52和VPS54。今年，我们搜索了可以通过过度经验来挽救GARP复合物中KO细胞中GPI锚定蛋白运输延迟的分子。将cDNA文库引入了VPS54-KO细胞，并用大提琴浓缩GPI锚固型蛋白的运输延迟而挽救的细胞，并确定了下一代序列以确定cDNA序列。结果，发现TMEM87A被鉴定为六个时间穿透性蛋白，功能未知，但已被鉴定出来。 VPS54-KO细胞中GPI锚固型蛋白和膜型蛋白的转运延迟已由于TMEM87A的过度表达而被救出。为了检查TMEM87A的运输异常运输是直接的还是间接的，VPS54-KO细胞具有过多的TMEM87A，并分析了霍乱毒素B亚基（CTXB）的回顾性转运。结果，TMEM87A的过度表达因CTXB转发异常而被救出。以上结果表明，TMEM87A对VPS54KO细胞的顺序和运输是间接的，并且TMEM87A可能是一个在端型TGN之间的改装运输途径中起作用的分子。 GPI锚定的Innocitol去除对于有效运输GPI锚固型蛋白是必不可少的。因此，今年，我们确定了参与GPI Innocitol DeAmination的分子。使用人类半half尺寸的细胞和下一个代代序列分析鉴定出参与GPI inoshitol去除的基因。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

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专利数量（0）

PGAP4 is a GPI-GalNAc transferase for generating GPI-anchor side chain

PGAP4 是一种 GPI-GalNAc 转移酶，用于生成 GPI 锚定侧链

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tetsuya Hirata;Morihisa Fujita;Shota Nakamura;Daisuke Motooka;Noriyuki Kanzawa;Yoshiko Murakami;Yusuke Maeda;Taroh Kinoshita
通讯作者：
Taroh Kinoshita

PGAP4, a multipass Golgi membrane protein, is GPI-GalNAc transferase for generating GPI-anchor side chain

PGAP4 是一种多通道高尔基体膜蛋白，是用于生成 GPI 锚定侧链的 GPI-GalNAc 转移酶

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tetsuya Hirata;Morihisa Fujita;Shota Nakamura;Daisuke Motooka;Noriyuki Kanzawa;Yoshiko Murakami;Yusuke Maeda;Taroh Kinoshita
通讯作者：
Taroh Kinoshita

Endosome-to-TGN retrograde transport mediated by GARP affects post-Golgi anterograde transport and glycosylation.

GARP 介导的内体到 TGN 逆行转运影响高尔基体后顺行转运和糖基化。