Ｔｈ１７細胞、制御性Ｔ細胞に着目した腎障害機序の検討

以 Th17 细胞和调节性 T 细胞为重点的肾损伤机制研究

• 批准号: 14J04837
• 负责人: 安田 圭子
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J04837/
• 关键词: Th17; GM-CSF; 腎尿細管間質障害; 制御性T細胞; Th17; GM-CSF; 腎尿細管間質障害; 制御性T細胞

GM-CSFはTh17細胞の炎症惹起作用において重要な役割を果たしているとされ、腎障害モデルにおけるTh17細胞の役割を考えるにあたって、GM-CSFそしてT細胞が活性化される際に重要な役割を果たすco-stimulatory factorについても検討を加える必要があると考えた。まず、naive T細胞をagonistic抗体の存在下で培養し、培養上清中のGM-CSF濃度を測定した。その結果、GITRのagonistic抗体であるDTA-1を使用した際に特異的にGM-CSFの産生増加を認めた。GITR/GITR-ligandの相互作用がGM-CSF産生において重要な役割を果たしていることが示唆された。GITR-ligand欠損マウス由来細胞を用いて詳細な解析を行った結果、腹腔内B1-B細胞のに最も強く発現しており、脾臓B細胞、脾臓DCにも中等度に発現していることが分かった。GITR-ligand欠損またはWTマウス由来の腹腔内B1-B細胞を抗原提示細胞(APC)としてnaiveT細胞を培養した結果、培養上清中のGM-CSF濃度は前者において有意に低値であった。GM-CSF産生のみならず、Th1、Th17条件下においてAPCとしてGITR-ligand欠損マウス由来の腹腔内B1-B細胞または脾臓B細胞を用いるとWT由来の細胞を用いた場合と比較して、有意にIFN-γあるいはIL-17の産生が低値であった。さらに、サイミジンをマーカーとして用いた細胞増殖assayの結果、APCとして腹腔内B1-B細胞を用いた方が脾臓B細胞を用いた結果よりも細胞増殖が有意に亢進しており、WTマウス由来細胞を用いた場合と比較してGITR-ligand欠損マウスは細胞増殖が有意に乏しい結果であった。これらの結果から、GITR-ligandは細胞増殖を亢進する作用があり、サイトカイン産生増大に作用することが示された。これらの作用が、腎障害モデルにおいてどのような作用を示すのかを検討するにあたり、ループス腎炎モデルに着目し、薬剤誘発性のプリスタン投与腎炎モデルマウスを作成しており、今後引き続き検討を行う予定である。

据说GM-CSF在TH17细胞的炎症作用中起着重要作用，在考虑Th17细胞在肾脏损伤模型中的作用时，我们还考虑了共刺激因素，该因子在GM-CSF和T细胞的激活中起着重要作用。首先，在存在激动剂抗体的情况下培养天真的T细胞，并测量培养上清液中的GM-CSF浓度。结果，当使用GITR的激动剂抗体DTA-1时，观察到GM-CSF的特定增加。有人建议GITR/GITR-配体相互作用在GM-CSF生产中起重要作用。使用源自GITR - 配体缺陷型小鼠的细胞进行了详细的分析，发现它在腹膜内B1-B细胞中最强烈表达，并在脾B细胞和脾脏DC中适度表达。使用源自GITR-配合缺陷型或WT小鼠作为抗原呈递细胞（APC）衍生自gitr-crigand缺乏症或WT小鼠的天真细胞在培养上清液中明显较低。不仅GM-CSF的产生，而且在TH1和TH17条件下，源自gitr-cri-deband缺乏的小鼠APC的腹膜内B1-B细胞或脾脏B细胞与使用WT衍生细胞时相比，APC作为TH1和TH17条件下的APC显示出明显较低的IFN-γ或IL-17的产生。此外，由于使用胸苷作为标志物细胞增殖测定结果，腹膜内B1-B细胞用作APC的细胞增殖显着增加，而不是使用脾脏B细胞时，与使用WT小鼠相比，使用Spleen B细胞时，细胞增殖较差。这些结果表明，GITR-配体具有增强细胞增殖的作用，并且对增加细胞因子的产生有效。在检查这些影响在肾脏损伤模型中的影响时，我们专注于狼疮肾炎模型，并创建了药物诱导的pristane pristane肾炎肾炎模型小鼠，我们计划将来继续研究它。