Ｔｈ１７細胞、制御性Ｔ細胞に着目した腎障害機序の検討

以 Th17 细胞和调节性 T 细胞为重点的肾损伤机制研究

基本信息

批准号：
14J04837
负责人：
安田圭子
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J04837/
关键词：
Th17 GM-CSF 腎尿細管間質障害制御性T細胞

项目摘要

GM-CSFはTh17細胞の炎症惹起作用において重要な役割を果たしているとされ、腎障害モデルにおけるTh17細胞の役割を考えるにあたって、GM-CSFそしてT細胞が活性化される際に重要な役割を果たすco-stimulatory factorについても検討を加える必要があると考えた。まず、naive T細胞をagonistic抗体の存在下で培養し、培養上清中のGM-CSF濃度を測定した。その結果、GITRのagonistic抗体であるDTA-1を使用した際に特異的にGM-CSFの産生増加を認めた。GITR/GITR-ligandの相互作用がGM-CSF産生において重要な役割を果たしていることが示唆された。GITR-ligand欠損マウス由来細胞を用いて詳細な解析を行った結果、腹腔内B1-B細胞のに最も強く発現しており、脾臓B細胞、脾臓DCにも中等度に発現していることが分かった。GITR-ligand欠損またはWTマウス由来の腹腔内B1-B細胞を抗原提示細胞(APC)としてnaiveT細胞を培養した結果、培養上清中のGM-CSF濃度は前者において有意に低値であった。GM-CSF産生のみならず、Th1、Th17条件下においてAPCとしてGITR-ligand欠損マウス由来の腹腔内B1-B細胞または脾臓B細胞を用いるとWT由来の細胞を用いた場合と比較して、有意にIFN-γあるいはIL-17の産生が低値であった。さらに、サイミジンをマーカーとして用いた細胞増殖assayの結果、APCとして腹腔内B1-B細胞を用いた方が脾臓B細胞を用いた結果よりも細胞増殖が有意に亢進しており、WTマウス由来細胞を用いた場合と比較してGITR-ligand欠損マウスは細胞増殖が有意に乏しい結果であった。これらの結果から、GITR-ligandは細胞増殖を亢進する作用があり、サイトカイン産生増大に作用することが示された。これらの作用が、腎障害モデルにおいてどのような作用を示すのかを検討するにあたり、ループス腎炎モデルに着目し、薬剤誘発性のプリスタン投与腎炎モデルマウスを作成しており、今後引き続き検討を行う予定である。

据说GM-CSF在Th17细胞的炎症作用中发挥着重要作用，当考虑Th17细胞在肾损伤模型中的作用时，值得注意的是GM-CSF和T细胞在激活中发挥着重要作用。我们认为也有必要考虑共刺激因素。首先，在激动性抗体存在下培养初始T细胞，测定培养上清中的GM-CSF浓度。结果，我们观察到使用 DTA-1（一种 GITR 激动性抗体）时 GM-CSF 产量出现特异性增加。有人提出，GITR/GITR-配体相互作用在 GM-CSF 产生中发挥重要作用。使用来自 GITR 配体缺陷小鼠的细胞进行详细分析的结果，我们发现它在腹膜内 B1-B 细胞中表达最强，在脾 B 细胞和脾 DC 中表达中等。当使用源自GITR配体缺陷或WT小鼠的腹腔内B1-B细胞作为抗原呈递细胞(APC)培养初始T细胞时，培养物上清液中的GM-CSF浓度在前者中显着较低。除了 GM-CSF 产生外，与使用 WT 衍生细胞相比，使用来自 GITR 配体缺陷小鼠的腹膜内 B1-B 细胞或脾 B 细胞时，在 Th1 和 Th17 条件下 APC 的产生显着增加。 IFN-γ或IL-17的水平较低。此外，使用胸苷作为标记物的细胞增殖测定结果显示，与使用脾B细胞时相比，使用腹腔内B1-B细胞作为APC时细胞增殖显着增强，并且与使用GITR的情况相比，WT小鼠来源的细胞-配体缺陷的小鼠，细胞增殖明显较差。这些结果表明GITR-配体具有促进细胞增殖和增加细胞因子产生的作用。为了研究这些效应在肾损伤模型中的表现，我们重点关注狼疮性肾炎模型，并创建了药物诱导的降植烷肾炎模型小鼠，我们计划在未来继续对此进行研究。