新規遺伝子変異標的ＳＦ３Ｂ１などによる骨髄異形成症候群の発症メカニズムの解明

阐明SF3B1等新基因突变靶点引起的骨髓增生异常综合征的发病机制

• 批准号: 14J03784
• 负责人: 昆 彩奈
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University (2015)The University of Tokyo (2014)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J03784/
• 关键词: 骨髄異形成症候群; 遺伝子変異; スプライシング因子; マウスモデル; 遺伝子改変マウス

本研究では、骨髄異形成症候群(MDS)で高頻度に変異していることが近年報告された新規遺伝子標的SRSF2が、MDSの病態において果たす分子メカニズムの解明を行った。近年、MDSの全エクソン解析により、スプライシング関連遺伝子が高頻度に変異していることが同定されたが、その機能は未知であった。そこで、スプライシング因子であるSRSF2の遺伝子変異がin vivoでもたらす生物学的効果を検討するために、造血系組織に特異的に変異アレルを発現したコンディショナルノックインマウスを作成した。まず、致死量の放射線を照射したレシピエントマウスに、変異マウス由来の骨髄細胞を経静脈的に移植し、造血系の表現系の観察をおこなった。変異マウスでは、野生型マウスと比較して、貧血および白血球減少を認めたほか、骨髄細胞表面マーカー解析により、造血幹／前駆細胞分画、およびより分化した細胞分画の減少を認めた。形態学的には骨髄細胞の異形成を認めた。競合的骨髄移植実験では、SRSF2変異マウスでは造血幹細胞の長期骨髄再構築能の低下を認めた。SRSF2変異マウスの造血・前駆細胞分画をFACSソーティングにより採取し、RNAシーケンスを行うことにより、変異マウスの表現系の原因となる標的遺伝子を複数同定した。以上の結果より、SRSF2変異を有する造血幹細胞は、骨髄再構築能の低下および分化異常をもたらすことが明らかになった。多数症例のMDSを対象とした網羅的な変異解析の結果からは、MDSの発症には平均して数個のドライバー変異が必要であることが示唆されており、SRSF2遺伝子変異のコンディショナルノックインマウスを、MDSにおいて共存頻度の高い遺伝子変異アレルを有するマウス (TET2)に関するコンディショナルノックアウトマウスを交配させることでMDS疾患モデルマウスの構築を進めている。

在这项研究中，我们阐明了SRSF2（一种最近报道在骨髓增生异常综合征（MDS）中频繁突变的新基因靶标）在MDS病理学中发挥作用的分子机制。近年来，MDS全外显子分析发现剪接相关基因经常发生突变，但其功能尚不清楚。因此，为了在体内研究剪接因子SRSF2基因突变的生物学效应，我们创建了在造血组织中特异性表达突变等位基因的条件敲入小鼠。首先，将来自突变小鼠的骨髓细胞静脉移植到接受致死剂量放射线照射的受体小鼠中，观察造血系统。与野生型小鼠相比，突变小鼠表现出贫血和白细胞减少症，骨髓细胞表面标记物分析显示造血干/祖细胞分数和更多分化细胞分数减少。形态学上观察到骨髓细胞发育不良。在竞争性骨髓移植实验中，SRSF2突变小鼠表现出造血干细胞重建长期骨髓的能力下降。通过 FACS 分选和 RNA 测序收集 SRSF2 突变小鼠的造血/祖细胞部分，我们鉴定了与突变小鼠表型相关的多个靶基因。上述结果揭示，SRSF2突变的造血干细胞骨髓重塑能力降低，分化异常。对多例MDS的综合突变分析结果表明，平均而言，MDS的发病需要多个驱动突变，我们正在将SRSF2基因突变的条件敲入小鼠与SRSF2基因突变小鼠杂交，构建MDS疾病模型小鼠。条件性敲除经常在MDS中共存的基因突变等位基因（TET2）的小鼠。

项目成果

Somatic Mutations and Clonal Hematopoiesis in Aplastic Anemia.

• DOI: 10.1056/nejmoa1414799
• 发表时间: 2015-07-02
• 期刊: The New England journal of medicine
• 作者: Yoshizato T;Dumitriu B;Hosokawa K;Makishima H;Yoshida K;Townsley D;Sato-Otsubo A;Sato Y;Liu D;Suzuki H;Wu CO;Shiraishi Y;Clemente MJ;Kataoka K;Shiozawa Y;Okuno Y;Chiba K;Tanaka H;Nagata Y;Katagiri T;Kon A;Sanada M;Scheinberg P;Miyano S;Maciejewski JP;Nakao S;Young NS;Ogawa S
• 通讯作者: Ogawa S

Srsf2 P95H mutation results in impaired stem cell repolupation and compromised hematopoietic differentiation in mice.

Srsf2 P95H 突变导致小鼠干细胞再增殖受损和造血分化受损。

• 发表时间: 2015
• 作者: Ayana Kon;Satoshi Yamazaki;Yusuke Shiozawa;Yasunori Ota;Keisuke Kataoka, Tetsuichi Yoshizato;Masashi Sanada;Kenichi Yoshida;Manabu Nakayama;Haruhiko Koseki;Hiromitsu Nakauchi;Seishi Ogawa
• 通讯作者: Seishi Ogawa

Srsf2 P95H mutation results in impaired stem cell functions and compromised hematopoietic differentiation in mice

Srsf2 P95H 突变导致小鼠干细胞功能受损和造血分化受损

• 发表时间: 2015
• 作者: Ayana Kon;Satoshi Yamazaki;Yusuke Shiozawa;Yasunori Ota;Keisuke Kataoka, Tetsuichi Yoshizato;Masashi Sanada;Kenichi Yoshida;Manabu Nakayama;Haruhiko Koseki;Hiromitsu Nakauchi;Seishi Ogawa;Ayana Kon
• 通讯作者: Ayana Kon

Biological and genetic characterization of SRSF2 mutations in the pathogenesis of MDS.

MDS 发病机制中 SRSF2 突变的生物学和遗传学特征。

• 发表时间: 2015
• 作者: Ayana Kon;Satoshi Yamazaki;Yusuke Shiozawa;Yasunori Ota;Keisuke Kataoka, Tetsuichi Yoshizato;Masashi Sanada;Kenichi Yoshida;Manabu Nakayama;Haruhiko Koseki;Hiromitsu Nakauchi;Seishi Ogawa
• 通讯作者: Seishi Ogawa

Variegated RHOA mutations in adult T-cell leukemia/lymphoma

• DOI: 10.1182/blood-2015-06-644948
• 发表时间: 2016-02-04
• 期刊: BLOOD
• 影响因子: 20.3
• 作者: Nagata, Yasunobu;Kontani, Kenji;Ogawa, Seishi
• 通讯作者: Ogawa, Seishi