gp91phox遺伝子に対するsiRNAを用いた心不全に伴う心室性不整脈の治療

使用针对 gp91phox 基因的 siRNA 治疗与心力衰竭相关的室性心律失常

基本信息

批准号：
19659205
负责人：
中村一文
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

検討1 【目的】心不全患者の心筋において、酸化ズトレス発生が亢進している。中でも過酸化脂質の最終代謝産で、有害アルデヒドである4-Hydroxy-2-nonenal(HNE)が拡張型心筋症患者ならびに拡張相肥大型心筋症患者の不全心筋に蓄積している事を我々は報告してきた(Nakamura K, et al. Circulation2002, J Card Fai1 2005)。今回我々は、HNEが活性酸素発生を介して心筋内カルシウム濃度を増加させると仮定して、実験を行った。【方法】成人ラットの単離心筋においてHNEが活性酸素を発生させるかどうか2',7'-dichlorofluorescin diacetate fluorescence(DCF)を用いて検討した。fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。【結果】(1)DCF用いて検討したところ、HNE(10 to 100μmol/L)によって、濃度依存性に螢光強度が増強した。すなわち活性酸素が発生した。その発生はNADPH oxidaseの阻害剤(Diphenyleneiodinum : DPIならびにApocynin)によって抑制された。(2)次に、fura-2を用いて心筋細胞内カルシウム濃度を測定した。病的状態に発生しうる高濃度のHNE(400pmol/L)は、心筋において時間依存性に心筋細胞内カルシウム濃度を増加させた。そして最終的に67%の細胞においてhypercontractureをひきおこした。(3)抗酸化酵素であるカタラーゼと、抗酸化作用をもつβ遮断薬であるカルベジロールは心筋細胞内カルシウム濃度増加を有意に減弱させ、hypercontractureの発生を抑制した。抗酸化作用のないβ遮断薬であるプロプラノロールはCa濃度の増加を減弱させなかった。更にL型Ca遮断薬であるverapamilならびにNa/Ca exchanger(NCX)のリバースモードの阻害剤であるKB-R7943も心筋細胞内Ca濃度増加を一部抑制した。【考案】心不全患者の心筋において、酸化ストレス発生が充進しており、その産物であるHNEは、NADPH oxidase由来の活性酸素発生を介して心筋細胞においてCa過負荷を引き起こした。検討2【目的】実際にHNEが心室性不整脈・心室細動(VF)に関与するかどうかBrugada症候群の心筋組織において検討した。【方法】Brugada型心電図の患者の心筋組織におけるHNEeの量とVFの発症について検討する。【結果】SCN5A遺伝子変異を持たない患者においてはVFの有無と心筋HNEの量に関係がなかったが、SCN5A遺伝子変異を持つ患者においては、VF既往患者の方が既往のない患者にくらべ、HNE量が多かった。【考案】Brugada症候群患者において、VF陽性例の心筋で酸化ストレスが増大していた。酸化ストレスがVF発症に関与する可能性が考えられた。上述の結果は、Cardiovasc Pathol(In press)にて報告した。

研究1 [目的]心力衰竭患者心肌中氧化应激产生加速。特别是，我们发现 4-羟基-2-壬烯醛 (HNE) 是一种有毒醛，是脂质过氧化物的最终代谢产物，据报道在扩张型心肌病和肥厚型心肌病患者的衰竭心肌中积聚（Nakamura. K 等人，Circulation2002，J Card Fai1 2005）。在本实验中，我们假设 HNE 通过产生活性氧来增加心肌内钙浓度。 [方法]利用2',7'-二氯荧光素二乙酸荧光（DCF）研究HNE是否在成年大鼠离体心肌中产生活性氧。使用fura-2 测量心肌细胞中的钙浓度。 [结果] (1)当使用DCF进行研究时，HNE（10至100μmol/L）以浓度依赖性方式增强荧光强度。换句话说，产生了活性氧。 NADPH 氧化酶抑制剂（二亚苯基碘：DPI 和罗布麻宁）可抑制其发生。 (2)接下来，使用fura-2测定心内钙浓度。病理条件下可能出现的高浓度 HNE (400 pmol/L) 会以时间依赖性方式增加心肌内钙离子浓度。最后，67% 的细胞出现过度挛缩。 (3)抗氧化酶过氧化氢酶和具有抗氧化活性的β受体阻滞剂卡维地洛显着减弱心内钙浓度的增加并抑制过度挛缩的发生。普萘洛尔是一种不具有抗氧化特性的 β 受体阻滞剂，不会减弱 Ca 浓度的增加。此外，L 型 Ca 阻滞剂维拉帕米和 Na/Ca 交换器 (NCX) 反向模式抑制剂 KB-R7943 也部分抑制心内 Ca 浓度的增加。 [产品描述] 心力衰竭患者心肌中氧化应激的产生增强，其产物HNE通过NADPH氧化酶产生的活性氧导致心肌细胞Ca超载。研究2 [目的]我们研究HNE是否确实参与了Brugada综合征心肌组织中的室性心律失常和心室颤动（VF）。 [方法]调查Brugada心电图患者心肌组织中HNEe含量及室颤发作情况。 [结果]在无SCN5A基因突变的患者中，有无VF与心肌HNE的量没有关系，但在有SCN5A基因突变的患者中，有VF病史的患者比无VF病史的患者HNE水平更高VF 的历史有很多。 [设计] VF阳性的Brugada综合征患者心肌氧化应激增加。人们认为氧化应激可能参与了VF的发生。上述结果报道于《Cardiovasc Pathol》（正在出版）中。