遺伝子発現を指標にした卵質評価方法の開発

以基因表达为指标的鸡蛋品质评价方法的建立

• 批准号: 19658072
• 负责人: 鈴木 徹
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19658072/
• 关键词: 卵質; 種苗生産; レチノイン酸; アリル炭化水素受容体; 脊椎骨; レチノイン酸受容体; アリル炭化永素受容体; 卵巣培養; 顕微注入; レチノイド; カロテノイド

昨年度、FITC標識したビテロゲニン(Vg)を用い、Vgの卵母細胞への取り込みを蛍光でモニターする技術を開発した。さらに培養条件下でFITC-Vgが取り込まれれば、卵母細胞を培養条件下で発生し、ビタミンA等の栄養素が卵成熟に及ぼす影響を培養条件下で解析できるのではと着想した。FITC-Vgを加えた培地でゼブラフィッシュの卵母細胞を培養したが、残念ながらFITC-Vgは濾胞細胞の表面で留まって卵母細胞には取り込まれず、想定した培養系は実現しなかった。環境水中の汚染物質が胚に及ぼす影響を調べることを目的として、ダイオキシンに代わる標準毒性化合物であるジクロロアニリン(DCA)に胚を曝露して、シトクロムP450系酵素(cyp1aとアリル炭化水素受容体ahrの発現を解析した。その結果、孵化前の胚ではDCAによってcyp1aの発現が体表の表皮細胞で強力に誘導され、ahrの発現は変動しないことが分かった。cyp1aの発現により、環境汚染物質の胚への影響をモニターできる可能性が考えられた。メダカ胚を用いた実験で、過剰なレチノイン酸(RA)は脊椎骨融合を起こし、RA欠乏は脊椎骨の低形成を起こすことが分かったので、RAの脊椎骨発生における役割を解析することを目的として、RA合成酵素raldh2、RA分解酵素qyp26a1、RA受容体rara1、RA応答遺伝子shhの発現をトラフグ仔魚で解析した。raldh2は脊椎骨に隣接する脊髄と腹大動脈で発現し、rara1は脊椎骨を形成する骨芽細胞で発現し、shhは権間靱帯および脊索鞘を挟んで位置する脊索細胞で発現することが分かった。これらの結果から、背骨の発生に必要なRAは脊髄と腹題動脈から供給され、主に椎体を形成する骨芽細胞と椎間板部分で利用されているものと考えられた。

去年，我们开发了一项技术，使用 FITC 标记的卵黄蛋白原 (Vg)，通过荧光监测卵母细胞对 Vg 的摄取。此外，如果在培养条件下掺入FITC-Vg，则可以在培养条件下产生卵母细胞，并分析维生素A等营养物质对培养条件下卵母细胞成熟的影响。斑马鱼卵母细胞在含有FITC-Vg的培养基中进行培养，但遗憾的是，FITC-Vg残留在卵泡细胞表面，没有融入卵母细胞中，因此没有实现预期的培养体系。为了研究环境水中污染物对胚胎的影响，我们将胚胎暴露于二氯苯胺（DCA），这是一种替代二恶英的标准有毒化合物。我们在孵化前分析了胚胎中 cy 的表达。结果发现，体表表皮细胞中p1a的表达被强烈诱导，而ahr的表达没有变化。cyp1a的表达可用于监测环境污染物对胚胎的影响。胚胎显示，过量的视黄酸（RA）会导致椎骨融合，RA缺乏会导致椎骨发育不全。为了分析RA在椎骨发育中的作用，我们分析了虎河豚幼虫脊髓和腹主动脉附近的RA合成酶raldh2、RA降解酶qyp26a1、RA受体rara1和RA反应基因shh的表达。到椎骨；这些结果表明，rara1在形成椎骨的成骨细胞中表达，并且shh在位于间韧带和脊索鞘之间的脊索细胞中表达，这表明RA是脊髓发育所必需的。由腹腔动脉供应，主要由形成椎体和椎间盘的成骨细胞使用。

项目成果

ゼブラフィッシュ胚発生においてDNA新規メチル化がoct4遺伝子の発現に与える影響の解析

斑马鱼胚胎发育过程中DNA从头甲基化对oct4基因表达的影响分析

• 发表时间: 2010
• 作者: 阿部光太;橋本寿史;鈴木徹
• 通讯作者: 鈴木徹

トラフグRALDH2のクローニング-魚類ビタミンAの胚発生での役割解明に向けて-

克隆虎河豚 RALDH2 - 阐明鱼类维生素 A 在胚胎发育中的作用 -

• 发表时间: 2008
• 作者: 宇治督

ゼブラフィッシュ胚発生におけるDNA(cytosine-5-)-methyltransferase 3 (dnmt3)の発現とoct4遺伝子のプロモーターのメチル化についての解析

斑马鱼胚胎发育过程中 DNA(胞嘧啶-5-)-甲基转移酶 3 (dnmt3) 表达和 oct4 基因启动子甲基化分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 阿部光太;橋本寿史;鈴木徹
• 通讯作者: 鈴木徹

GFP-expression vectors inserted with Takifugu Collal, GCH1 and PCNA promoters visualize osteoblats, chromatophore precursors and dividing cells, respectively, in zebrafish

插入 Takifugu Collal、GCH1 和 PCNA 启动子的 GFP 表达载体分别使斑马鱼中的成骨细胞、色素细胞前体和分裂细胞可视化

• 发表时间: 2008
• 作者: 仲野亮

ゼブラフィッシュ胚への顕微注入による、抗酸化物質の酸化ストレスに対する耐性付与効果の解析

通过显微注射斑马鱼胚胎分析抗氧化剂对赋予抗氧化应激能力的影响

• 发表时间: 2008
• 作者: 鈴木 徹