新規ＮＡＳＨモデルを用いたマクロファージの病態生理的意義の解明と医学応用

使用新的 NASH 模型阐明巨噬细胞的病理生理学意义及其医学应用

基本信息

批准号：
14J40047
负责人：
伊藤美智子
金额：
$ 2.16万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J40047/
关键词：
慢性炎症マクロファージ crown-like structure Crown-like structure

项目摘要

申請者らはメラノコルチン4型受容体欠損マウス（MC4R-KOマウス）を用いて、肥満による代謝障害を背景に脂肪肝から肝線維化を発症する新規NASHモデルを確立し、NASHの肝臓において細胞死に陥った肝細胞をマクロファージが取り囲むhCLS（hepatic crown-like structure）が多数認められることを見出した。既にhCLS数が肝線維化の程度と相関することを報告しているが、実際にマクロファージを消去することでNASHの病態形成におけるhCLSの関与を検討した。単純性脂肪肝ではクロドロネートリポソームによってマクロファージが効率的に消失し、炎症・線維化マーカーの発現が有意に低下した。一方、NASHを発症したMC4R欠損マウスに対してクロドロネートリポソームを投与すると、hCLS特異的にマクロファージが残存し、炎症・線維化マーカーの発現や活性化筋線維芽細胞のマーカーであるαSMAの陽性面積にも変化は認められなかった。以上から、hCLS構成マクロファージは散在性マクロファージとは異なる性質を持ち、炎症・線維化促進に作用することが示唆された。次に、hCLS構成マクロファージがCD11c陽性であることから、ジフテリア毒素（DT）投与によってCD11c発現細胞を消去できるマウス（CD11c-DTRマウス）の骨髄を移植したMC4R欠損マウスにNASHを誘導し、DTを単回投与後、経時的に観察した。組織学的解析においてDT投与1日後にはhCLSが消失し、5日後には回復した。hCLS消去に伴ってTGFβやPDGF-Bなどの発現が低下し、hCLSが線維化促進因子のソースとなってNASH発症に寄与していることが示唆された。

申请人使用黑皮质素4型受体缺陷型小鼠（MC4R-KO小鼠）建立了一种新的NASH模型，该模型中由于肥胖引起的代谢紊乱而导致脂肪肝发展为肝纤维化，我们发现许多hCLS（肝冠样结构）。，其中观察到巨噬细胞包围堕落的肝细胞。尽管已有报道hCLS的数量与肝纤维化程度相关，但我们通过实际消除巨噬细胞来研究hCLS在NASH发病机制中的参与。在单纯性脂肪肝中，氯膦酸盐脂质体有效消除巨噬细胞，并显着降低炎症和纤维化标志物的表达。另一方面，当将氯膦酸盐脂质体给予患有NASH的MC4R缺陷小鼠时，hCLS特异性巨噬细胞仍然存在，炎症/纤维化标记物的表达以及αSMA（活化的肌成纤维细胞标记物）的阳性区域没有观察到变化。由上可知，构成hCLS的巨噬细胞具有与弥漫性巨噬细胞不同的性质，具有促进炎症和纤维化的作用。接下来，由于构成 hCLS 的巨噬细胞是 CD11c 阳性，因此我们在移植了来自小鼠骨髓（CD11c-DTR 小鼠）的 MC4R 缺陷小鼠中诱导了 NASH，该小鼠可以通过给予白喉毒素（DT）来消除表达 CD11c 的细胞。随着时间的推移进行了观察。组织学分析显示hCLS在DT给药后1天消失，5天后恢复。 hCLS缺失后TGFβ、PDGF-B等的表达降低，表明hCLS是促纤维化因子的来源并有助于NASH的发生。