トコトリエノールによる血管新生抑制効果とその作用機構解析

生育三烯酚的血管生成抑制作用及其作用机制分析

基本信息

批准号：
07J06539
负责人：
柴田央
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

【研究実績概要】細胞実験:生体内の腫瘍環境を考慮し、通常酸素分圧、低酸素分圧下でのDLD-1の培養系を用いて、フローサイトメトリーによる解析を行った。その結果、通常酸素分圧下よりも低酸素分圧下、トコトリエノール(T3)処理24時間でDLD-1の細胞周期停止を強く誘導した。T3を48時間処理した場合、sub-G1期の増加から細胞周期停止からアポトーシスへの移行を確認し、この効果は低酸素分圧下で顕著であった。作用機構を明らかにするため、ウエスタンブロット解析により、T3は細胞周期停止タンパク質であるp21やp27の発現を増加させ、細胞周期促進タンパクであるCDK4の発現を減少させるとともに、アポトーシス誘導に関わるカスパーゼ3とカスパーゼ9タンパクの活性化をもたらすことを見出した。またT3処理により、腫瘍増殖マーカーとして知られるリン酸化Aktが減少することを明らかとした。このとき、Aktの総タンパク量に変化はなかった。動物実験:DLD-1細胞をヌードマウス背部皮下に注入し腫瘍を形成させたマウスに、高純度米糠T3を経口投与し、腫瘍の体積と重量が有意に抑制されることを平成20年度試験により明らかとした。本年度試験において、この腫瘍部位のビタミンE量を蛍光HPLCで測定した結果、腫瘍部位に多量のT3が移行することを確認した。さらに腫瘍部位のタンパク発現をウエスタンブロット法により解析した結果、培養細胞試験の結果と同様、T3はカスパーゼ3、カスパーゼ9タンパクを活性化させた。さらにT3投与群の腫瘍では、リン酸化Aktの減少も確認された。このT3投与群でのリン酸化Aktの減少は、リン酸化Akt抗体を用いた免疫組織化学染色においても抗原染色の減少により確認でき、これらの結果からT3の強力な抗腫瘍効果とその作用機構をin vivo試験で明らかとした。

[研究结果总结] 细胞实验：考虑体内肿瘤环境，使用DLD-1培养系统在正常氧分压和低氧分压下通过流式细胞术进行分析。结果，在低氧分压下生育三烯酚（T3）处理24小时比在正常氧分压下更强烈地诱导DLD-1的细胞周期停滞。当用T3处理48小时时，亚G1期的增加证实了从细胞周期停滞到凋亡的转变，并且这种作用在低氧张力下显着。为了阐明其作用机制，Western blot 分析显示，T3 增加细胞周期阻滞蛋白 p21 和 p27 的表达，降低细胞周期促进蛋白 CDK4 的表达，并诱导 caspase 3，参与细胞凋亡的诱导和激活。 caspase-9 蛋白。我们还发现 T3 治疗降低了磷酸化 Akt，Akt 被称为肿瘤增殖标志物。此时Akt的总蛋白量没有变化。动物实验：2008年的一项研究表明，给小鼠口服高纯度米糠T3，将DLD-1细胞皮下注射到裸鼠背部形成肿瘤，肿瘤的体积和重量明显受到抑制事情变得清楚了。在今年的研究中，我们使用荧光HPLC测量了该肿瘤部位的维生素E含量，结果证实大量T3迁移到了肿瘤部位。此外，通过蛋白质印迹分析肿瘤部位的蛋白质表达表明，T3 激活 caspase-3 和 caspase-9 蛋白，与培养细胞测试的结果相似。此外，在 T3 治疗组的肿瘤中也证实了磷酸化 Akt 的减少。 T3施用组中磷酸化Akt的减少也可以通过使用磷酸化Akt抗体的免疫组织化学染色中抗原染色的减少来证实，并且这些结果证明了T3的强抗肿瘤作用及其作用机制。体内测试。