細胞内生態解析に基づいた樹状細胞選択的DNAワクチンの開発

基于细胞内生态学分析的树突状细胞选择性DNA疫苗的开发

基本信息

批准号：
07J03317
负责人：
中村孝司
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度は、タンパク質抗原を用いた樹状細胞へのデリバリーを行い、抗原提示と抗腫瘍効果の評価を行った。本年度では、DNAワクチンの前段階としてsiRNAを樹状細胞に導入し、機能を示すキャリアを見出した。R8/GALA-DMENDを用いた樹状細胞におけるSOCS1のノックダウンDNAワクチンの前段階としてsiRNAを樹状細胞に導入し、その効果を調べた。当研究室で開発されたR8/GALA-DMENDはエンドソーム脱出のための機能性素子であるGALAと膜枚数の制御により、培養細胞で高いRNAi効果を示すことが明らかになっている。本年度では、樹状細胞においてサイトカインシグナルの抑制因子であるSOCS1を標的としたR8/GALA-DMENDの機能評価を行った。siRNAを封入したR8/GALA-DMENDを樹状細胞に導入した結果、未処理の樹状細胞と比較して87.5%の発現抑制が認められた。またSOCS1をノックダウンした樹状細胞ではTNF-αやIL-6産生が増加した。さらにSOCS1をノックダウンした樹状細胞をマウスに投与した後、癌細胞をマウスに移植し、その増殖を観察した。その結果、コントロールsiRNAを用いた場合と比較して著しい腫瘍増殖抑制が認められた。以上のことから、R8/GALA-DMENDは樹状細胞においても十分なRNAi効果を誘導できるキャリアであることが明らかになった(Akita H et al.J.Control.Release)。本年度の成果によりR8/GALA-DMENDが樹状細胞への核酸デリバリーシステムとして有用であることが示された。故にR8/GALA-DMENDはDNAワクチンのデリバリーシステムとしての応用が期待される。

去年，我们将蛋白质抗原递送至树突状细胞并评估抗原呈递和抗肿瘤效果。今年，我们将 siRNA 引入树突状细胞，作为 DNA 疫苗的第一步，并找到了功能载体。使用 R8/GALA-DMEND 敲低树突状细胞中的 SOCS1 作为 DNA 疫苗的初步步骤，将 siRNA 引入树突状细胞并研究其效果。我们实验室开发的 R8/GALA-DMEND 通过控制 GALA（内体逃逸的功能元件）和膜的数量，在培养细胞中表现出高 RNAi 效果。今年，我们评估了 R8/GALA-DMEND 的功能，该药物靶向树突状细胞中细胞因子信号抑制因子 SOCS1。将含有siRNA的R8/GALA-DMEND导入树突状细胞后，与未处理的树突状细胞相比，观察到87.5%的表达抑制。此外，SOCS1 被敲低的树突状细胞会增加 TNF-α 和 IL-6 的产生。此外，将SOCS1被敲低的树突状细胞给予小鼠后，将癌细胞移植到小鼠体内并观察其增殖。结果，与使用对照siRNA时相比，观察到显着的肿瘤生长抑制。由上可知，R8/GALA-DMEND是即使在树突状细胞中也能够诱导充分的RNAi效果的载体(Akita H等J.Control Release)。今年获得的结果表明，R8/GALA-DMEND 可用作树突状细胞的核酸递送系统。因此，R8/GALA-DMEND有望作为DNA疫苗递送系统得到应用。