肺疾患におけるRas-ERKカスケードの調節機構の解明とその治療に関する研究

Ras-ERK级联在肺部疾病及其治疗中的调控机制研究

• 批准号: 12J05613
• 负责人: 高野 晴子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J05613/
• 关键词: 肺線維症; 肺癌; Ras-ERKカスケード; ノックアウトマウス

私たちのグループは過去に内在的なRas-ERKカスケードのドミナントネガティブアンタゴニストとしてDA-Rafを同定し、DA-Rafを特異的に欠損するノックアウト(DA-Raf-KO)マウスを作製した。Ras-ERKカスケードは、ブレオマイシン(BLM)誘導性の肺線維症に関与しているが、その調節機構は明らかにされていない。昨年度の解析から、DA-Rafは2型肺胞上皮細胞(AEC2)においてBLM誘導性の肺線維症にRas-ERKカスケードの抑制を介して関わっている可能性が示唆された。そこでDA-Raf-KOマウスを用いて、以下の事柄を明らかにした。(1)DA-Raf-KOマウスではwtマウスに比較して、BLMが誘導する好中球などの炎症性細胞の浸潤を多く認めた。(2)DA-Raf-KOマウスにおいて炎症性サイトカインの発現亢進を認めた。従って、DA-RafはBLMが誘導する炎症反応を抑制的に制御すると考えられた。BLMは肺胞上皮細胞を標的とし、さらにDA-RafがAEC2に発現しているので、ラットAEC2株(RLE-6TN細胞)を用いて、分子メカニズムについて明らかにした。(1)DA-Rafのノックダウン(KD)によりBLMが誘導する炎症性サイトカインの発現がさらに増強された。(2)この炎症性サイトカインの発現上昇はp38インヒビターによって抑制された。(3)近年の研究からp38シグナリングは、BLMが肺胞上皮細胞に誘導するSASP (senescence-associated secretory phenotype)において中心的役割を果たすことが知られているので、DA-RafとSASPについてさらに解析した。(4)RLE-6TN細胞にBLMを添加するとSA-β-galの活性上昇と細胞の扁平化が見られた。(5)DA-RafのKDにより、BLM誘導性のSA-β-galの活性上昇と細胞の扁平化はさらに増悪した。これらのことから、DA-Rafは38シグナリングの上流でRas-ERKカスケードを抑制することによってBLM誘導性のSASPを抑制的に制御すると考えられる。

我们的小组先前将DA-RAF确定为内源性Ras-ERK级联反对的主要负拮抗剂，并产生的敲除（DA-RAF-KO）小鼠在DA-RAF中特别缺乏。 RAS-ERK级联反应参与博来霉素（BLM）诱导的肺纤维化，但尚未澄清其调节机制。去年的分析表明，通过抑制RAS-ERK Cascade，DA-RAF可能参与BLM诱导的2型肺泡上皮细胞（AEC2）的肺纤维化（AEC2）。因此，使用DA-RAF-KO小鼠揭示了以下内容。 （1）与WT小鼠相比，DA-RAF-KO小鼠显示出更多的炎性细胞，例如BLM诱导的中性粒细胞。 （2）在DA-RAF-KO小鼠中观察到炎性细胞因子的表达增加。因此，人们认为DA-RAF抑制了BLM诱导的炎症反应。由于BLM靶标肺泡上皮细胞和DA-RAF在AEC2中表达，因此使用大鼠AEC2菌株（RLE-6TN细胞）阐明了分子机制。 （1）DA-RAF的敲低（KD）进一步增强了BLM诱导的炎症细胞因子的表达。 （2）P38抑制剂抑制了炎性细胞因子的表达增加。 （3）最近的研究表明，p38信号传导在肺泡上皮细胞诱导的SASP（感应相关的分泌表型）中起着核心作用，并且对DA-RAF和SASP的进一步分析。 （4）在RLE-6TN细胞中添加BLM显示出SA-β-GAL的活性和细胞变平的活性增加。 （5）DA-RAF的KD进一步加剧了BLM诱导的SA-β-GAL活性和细胞变平的增加。从这些发现中，DA-RAF被认为可以通过抑制38个信号传导上游的RAS-ERK级联反应来抑制BLM诱导的SASP。

项目成果

RhoD activated by fibroblast growth factor induces cytoneme-like cellular protrusions through mDia3C.

• DOI: 10.1091/mbc.e12-04-0315
• 发表时间: 2012-12
• 期刊: Molecular biology of the cell
• 影响因子: 3.3
• 作者: Koizumi K;Takano K;Kaneyasu A;Watanabe-Takano H;Tokuda E;Abe T;Watanabe N;Takenawa T;Endo T
• 通讯作者: Endo T

Ras-ERKカスケードのアンタゴニストDA-Rafは肺胞形成を制御している

DA-Raf 是 Ras-ERK 级联的拮抗剂，调节肺泡形成

• 作者: 中村哲也;渡辺守;高野晴子，幡野雅彦，坂本明美，高野和儀，徳久剛史，遠藤 剛
• 通讯作者: 高野晴子，幡野雅彦，坂本明美，高野和儀，徳久剛史，遠藤 剛