細胞ダイニン軽鎖Tctex-1によるGタンパク質共役型受容体制御機構の解明

细胞动力蛋白轻链 Tctex-1 阐明 G 蛋白偶联受体调节机制

基本信息

批准号：
18890015
负责人：
斎藤将樹
金额：
$ 1.68万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

副甲状腺ホルモン(PTH)は血中Ca^<2+>濃度の制御に関わっており、骨リモデリングを促すことから骨粗鬆症治療薬として注目を集めている。我々は以前、PTH受容体のカルボキシル末端に会合するタンパク質として細胞質ダイニン軽鎖の一種であるt-complex tesds expressed-l(Tctex-l)を見出し、Tctex-lがPTH受容体の細胞内内在化に関与することを示した。そこで本研究では,Tctex-lのPTH受容体シグナル伝達に対する影響を詳細に検討した。Tctex-l会合タンパク質は、酵母ツーハイブリッド系を用いて探索した。Tctex-lとMVPとの細胞内結合は、免疫沈降法により検討した。細胞表面PTH受容体量は細胞表面ビオチン化法にて、また、extracellular signal-regulated kinase1/2(ERK1/2)のリン酸化は、Western blottingにてそれぞれ検討した。酵母ツーハイブリッド系の結果、Tctex-l結合タンパク質としてmajor vault protein(MVP)を見出した。さらに、Tctex-lはMVPと細胞内で会合し、その会合には特にMVPのcoiled-coil domainが関与することが示された。野生型PTH受容体(PTHR-WT)発現細胞では、PTH刺激によるERK1/2リン酸化はMVPの過剰発現によって抑制されたが,Tctex-1との会合を欠損したPTH受容体変異体(PTHR-KRVS)発現細胞では抑制されなかった。また、どちらの細胞においてもEGF誘導性ERK1/2リン酸化はMVP過剰発現によって抑制されなかった。以上のことから、PTH受容体のシグナル伝達は、Tctex-lがMVPと複合体を形成することによって抑制される可能性が示唆された。

甲状旁腺激素(PTH)参与血液Ca 2+ 浓度的控制，并且由于其促进骨重塑而作为骨质疏松症的治疗剂而受到关注。我们之前发现t复合物tesdsexpressed-l（Tctex-l）是一种细胞质动力蛋白轻链，是一种与PTH受体羧基末端结合的蛋白质，表明它参与了PTH受体的表达。在这项研究中，我们详细研究了 Tctex-1 对 PTH 受体信号传导的影响。使用酵母双杂交系统探索了 Tctex-1 相关蛋白。通过免疫沉淀检查 Tctex-1 和 MVP 之间的细胞内结合。通过细胞表面生物素化检测细胞表面PTH受体的量，通过Western blotting检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）的磷酸化。作为酵母双杂交系统的结果，我们发现了主要穹窿蛋白（MVP）作为 Tctex-l 结合蛋白。此外，研究表明 Tctex-1 在细胞内与 MVP 结合，并且 MVP 的卷曲螺旋结构域特别参与这种结合。在表达野生型 PTH 受体 (PTHR-WT) 的细胞中，PTH 刺激的 ERK1/2 磷酸化被 MVP 的过表达抑制，但在表达野生型 PTH 受体 (PTHR-WT) 的细胞中，PTH 诱导 ERK1/2 磷酸化刺激被 MVP 的过度表达所抑制。此外，两种细胞中 MVP 过表达均不会抑制 EGF 诱导的 ERK1/2 磷酸化。综上所述，提示Tctex-1与MVP形成复合物可能抑制PTH受体信号转导。